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实验六 细胞核和线粒体的荧光观察

实验六 细胞核和线粒体的荧光观察. 一、 实验目的. 学习荧光显微镜的工作原理及使用方法 了解荧光探针 Rhodamine 123 和 Hoechst33342 与细胞成分的结合特性和光谱特性. 二、实验原理. 1. 荧光显微镜. 常用荧光探针介绍. Hoechst33342 和 Rhodamine 123 Ho.33342 是一种亲脂性物质，能与 DNA 特异性结合的荧光探针，所以被大量用于活细胞的观察和定量的研究。荧光激发和发射特性分别为 350nm 和 461nm 。

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实验六 细胞核和线粒体的荧光观察

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Presentation Transcript

  1. 实验六 细胞核和线粒体的荧光观察

  2. 一、实验目的 学习荧光显微镜的工作原理及使用方法 了解荧光探针Rhodamine 123 和Hoechst33342 与细胞成分的结合特性和光谱特性

  3. 二、实验原理 1.荧光显微镜

  4. 常用荧光探针介绍

  5. Hoechst33342和Rhodamine 123 Ho.33342是一种亲脂性物质，能与DNA特异性结合的荧光探针，所以被大量用于活细胞的观察和定量的研究。荧光激发和发射特性分别为350nm和461nm。 罗丹明123是一种亲脂性的阳离子荧光探针。用它来标记线粒体是由于线粒体的基质对于膜间隙具有负电荷，而罗丹明123具有正电荷，二者电性相吸。所以能较好地观察线粒体的形态变化。荧光激发和发射特性为507nm和529nm。

  6. 三、仪器、材料与试剂 仪器 荧光显微镜，倒置显微镜 材料 A549、WI-38 pc-3、载玻片，盖片，滴管，滤纸 试剂 PBS缓冲液pH7.4 Ho.33342储存液:1mg/mL(溶于PBS) 罗丹明123储存液: 1mg/mL(溶于甲醇)

  7. 四、实验步骤 1.将肿瘤细胞和正常组织细胞培养到小盖玻片上 2.配制Ho.33342和罗丹明123 工作液:Ho.33342 (10μg/mL), 罗丹明123(10μg/mL)（溶于PBS缓冲液，pH7.4） 3.将盖玻片上的细胞用PBS缓冲液轻轻漂洗2次 4.在parafilm 膜上分别滴加Ho.33342和罗丹明123工作液各10L，将盖玻片上的细胞倒扣在parafilm 膜上室温暗处孵育10min。 5.在parafilm 膜上加PBS缓冲液，待盖玻片被冲起后，再轻轻揭下盖玻片,用PBS缓冲液轻轻漂洗2次。 6.利用荧光显微镜观察细胞核、线粒体。

  8. 实验步骤 将肿瘤细胞和正常组织细胞培养到小盖玻片上, 至细胞进入对数生长期 配制Ho.33342和罗丹明123 工作液: Ho.33342 (10μg/mL), 罗丹明123(10μg/mL)（溶于PBS缓冲液，pH7.4） 将盖玻片上的细胞用PBS缓冲液轻轻漂洗2次，分别滴加Ho.33342和罗丹明123工作液各10L，室温暗处孵育10min 用 PBS缓冲液轻轻漂洗2次，放在载玻片上制成的小室上 利用荧光显微镜观察细胞核、线粒体

  9. 思 考 题 1. 荧光显微镜的工作原理，及使用时应注意的问题。 2. 细胞核的形态的变化与功能的关系

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