1 / 26

“Методы лабораторного исследования гемостаза”

“Методы лабораторного исследования гемостаза”. 1. Скрининговые исследования 2. Исследование сосудисто-тромбоцитарного звена гемостаза. Лабораторные методы, используемые в исследовании гемостаза:. Клоттинговые: (ВСК, ПВ, АПТВ, ТВ …) ‏ Хромогенные: (активность ATIII, PC, Pl) ‏

elpida
Download Presentation

“Методы лабораторного исследования гемостаза”

An Image/Link below is provided (as is) to download presentation Download Policy: Content on the Website is provided to you AS IS for your information and personal use and may not be sold / licensed / shared on other websites without getting consent from its author. Content is provided to you AS IS for your information and personal use only. Download presentation by click this link. While downloading, if for some reason you are not able to download a presentation, the publisher may have deleted the file from their server. During download, if you can't get a presentation, the file might be deleted by the publisher.

E N D

Presentation Transcript


  1. “Методы лабораторного исследования гемостаза” 1. Скрининговые исследования 2. Исследование сосудисто-тромбоцитарного звена гемостаза

  2. Лабораторные методы, используемые в исследовании гемостаза: • Клоттинговые: (ВСК, ПВ, АПТВ, ТВ …)‏ • Хромогенные: (активность ATIII, PC, Pl)‏ • Иммунологические:(количество отдельных факторов)‏ • ПЦР: (ДНК-диагностика наследственных гемофилий и тромбофилий: аномалия Лейдена, гомоцистеинемия, дефицит AT)‏ • Проточная цитофлуориметрия: (определение рецепторов тромбоцитов)‏ • Нефелометрия: (исследование функции тромбоцитов по методу Born)‏

  3. Клоттинговые методы: - основаны на определении времени образования, а также растворения сгустка в стандартных условиях; - определяется активность отдельных звеньев системы свертывания и фибринолиза.

  4. Хромогенные методы: - это хромогенное (оптическое) определение хромогенных (окрашенных) веществ (нитроанилина) связанных с субстратами (белками) специфических реакций; - так определяется активность отдельных компонентов свертывающей, антитромбиновой или фибринолитической системы. Пример: Стрептокиназа + плазминоген** = плазмин + свободный нитроанилин**(желтая окраска)‏

  5. Скрининговые тесты гемостаза: 1) Определение резистентности микрососудов: - манжеточная проба; -баночная проба; -проба щипка 2) Определение времени кровотечения: - по Дьюка; - по Айви; - по Шитиковой 3) Определение времени свертывания крови: - по Ли и Уайту

  6. Манжеточная проба Выполнение: Создают венозный стаз путем дозированного сжатия плеча манжеткой тонометра (90 мм на 5 минут) и подсчитывают количество петехий в в верхней ладонной поверхности предплечья и локтевого сгиба. Клиническое значение: Положительная проба возможна при врожденной ломкости капиляров, тромбоцитопении, значительной тромбоцитопатии, гиповитаминозе С, болезни Виллебранда, приеме непрямых антикоагулянтов, гормональном сдвиге у женщин, ДВС-синдроме.

  7. Время кровотечения - тест общего состояния сосудисто-тромбоцитарного звена гемостаза Выполнение: Определяют длительность кровотечения из микрососудов кожи после дозированного (3 мм) прокола ее ланцетом. Клиническое значение: Удлинение времени кровотечения возможна при значительной тромбоцитопении, тяжелых формах тромбоцитопатии (тробастения Гланцмана), болезни Виллебранда, приеме непрямых антикоагулянтов, гормональном сдвиге у женщин, ДВС-синдроме.

  8. Оценка работы первичного гемостаза

  9. Оценка работы первичного гемостаза Прибор для количественной оценки гемостатической функции тромбоцитов Platelet Function аnalyzer-100

  10. Определение количества тромбоцитов: (170-350х10/л)‏ 1) В мазке по Фонио: не может быть рекомендован из-за малой точности. 2) Подсчет в камере Горяева после гемолиза эритроцитов оксалатом аммония. 3) С помощью автоматического счетчика в венозной крови, стабилизированной ЭДТА.

  11. Исследование функции тромбоцитов Выполняется из венозной крови, стабилизированной цитратом натрия в соотношении 1/9; в течении 1 часа после забора крови. Богатая тромбоцитами плазма- отбирают после центрифугирования крови при 1000 оборотов /6 минут Бедная тромбоцитами плазма- отбирают после центрифугирования крови при 3000 оборотов/ 15 минут

  12. Исследование функции тромбоцитов: РЕТРАКЦИЯ В ПЛАЗМЕ (богатой тромбоцитами)‏ Пробирка полистироловая мерная: 2,5 мл забуференного физ.раствора 0,2 мл тромбина 0,2 мл Ca Cl2 (0,277%)‏ Добавить 0,2 плазмы, богатой тромбоцитами Перемешать, вылить в пластиковый шприц на 5,0 мл инкубировать 60 минут при 370С Вынуть сгусток Замерить объем Расчет: Vост/ Vобщ . 100%

  13. Исследование агрегации тромбоцитов • ТУРБИДИМЕТРИЧЕСКИЙ МЕТОД Борна- основан на регистрации изменений светопропускания богатой тромбоцитами плазмы после активации индукторами. • Индукторы агрегации - естественные или искуственные активаторы: • АДФ; • Адреналин; • Коллаген; • Ристоцетин и др.

  14. Агрегометр HELENA PACKS-4 • СПИСОК МЕТОДИК: • Агрегация с АДФ • Агрегация с эпинефрином • Агрегация с коллагеном • Агрегация с ристоцетином • Агрегация с арахидонатом • Активность фактора фон Виллебранда (по ристоцетин-кофакторной активности)‏ • Хромогенное определение: • Антитромбина III • Плазминогена • Протеина С • Гепарина • Активности фактора VIII

  15. Агрегометры AP 2110 Анализатор агрегации тромбоцитов предназначен для исследования in vitro агрегационных свойств тромбоцитов турбидиметрическим методом. Анализатор агрегации тромбоцитов АMS 600

  16. Агрегометры • Агрегометр LA230 ( " БИОЛА" Россия) Двухканальный анализатор агрегации тромбоцитов • Прибор позволяет проводить в каждом канале исследования агрегации тромбоцитов методом светопропускания и определения среднего радиуса тромбоцитарных агрегатов. Агрегометр тромбоцитарный "CHRONOLOG CORP." (США) Агрегометр 430 (одноканальный) Агрегометр 440VS(двухканальный) Агрегометр 470VS(четырехканальный) Оптический анализатор агрегации тромбоцитов служит для исследования агрегационных свойств тромбоцитов в плазме.

  17. Оптическая агрегометрия используется для исследования процессов агрегации на плазме обогащенной тромбоцитами (PRP), а также для измерения агглютинации латексных частиц и для исследования изменения формы взвешенных частиц. Оптические агрегометры «Хроно-лог» с успехом используются во всем мире уже многие годы, начиная с 1967 г и являются «золотым» стандартом в оптической агрегометрии. Двойной инфра-красный луч и чувствительный фотодетекторный модуль используется для определения разницы в световом прохождении между плазмой обогащенной и обедненной тромбоцитами. Цельная кровь, разведенная кровь, плазма обогащенная тромбоцитами, отмытые тромбоциты, отмытые лейкоциты – все эти образцы могут быть измерены с помощью импедансной технологии. Корпорация «Хроно-лог» обладает патентом на применение этого метода.

  18. Широкий спектр люминисцентных реакций (выброс АДФ, уровень ионизированного кальция, генерация супероксидов и др.) может быть измерен при помощи ультра-чувствительной фотоумножительной трубки, которая испльзуется в люми-агрегометрах корпорации “Хроно-лог”. Люминисценция используется для детекции всех дефектов накопления и секреции. Этот метод также достаточно чувствительный для детекции гепарин-индуцированной тромбопении.

  19. Тромбоэластограф Гематокоагулограф ГКГМ4-02 тромбоэластограф

  20. роТЭГ " • Анализатор гемостаза роТЭГ " это современный 4-х канальный компьютерный тромбоэластограф. ОСНОВНЫЕ ИЗМЕРЯЕМЫЕ ПАРАМЕТРЫ CT (время коагуляции) - общая активность коагуляционной системы CFT (время образования сгустка) и a-угол (начальная скорость оборазования сгустка) – оценка функции тромбоцитов, действия фактора XIII, полимеризации фибрина, активности гепарина MA (или MCF) – качество сгустка, оценка его механических свойств LOT (время наступления фибринолиза) – оценка фибринолитической активности l-угол – скорость фибринолиза ПРИМЕРЫ ГРАФИКОВ

  21. ИДЦ 2008-2011г.г. Автоматический коагулометр STA-R Evolution Roche Diagnostics, Франция

  22. Гемостаз в ИДЦ

  23. Полный гематологический анализ Миелограмма Протромбиновое время и фибриноген Коагулограмма стандартная Ретикулоциты Цитограмма (мазок из носа или глаза) LE-клетки Осмотическая резистентность эритроцитов Ретракция плазменного сгустка Агрегация тромбоцитов с АДФ Агрегация тромбоцитов с ристоцетином Агрегация тромбоцитов с арахидоновой кислотой Агрегация тромбоцитов с коллагеном Агрегация тромбоцитов с адреналином Определение фактора Виллебранда Активность фактора свертывания крови XII Активность фактора свертывания крови VIIIАктивность фактора свертывания крови IXАктивность фактора свертывания крови XI Активность комплекса протеина С (скрининг) Активность антитромбина III Активность протеина С Активность плазминогена Активность альфа-2-антиплазмина АПТВ с люпус-чувствительным кефалином Время кровотечения Коррекционно-ингибиторная проба по АПТВ Коррекционно-ингибиторная проба по ПТИ Определение групповой принадлежности по АВО Определение резус-антигенов Фибринолиз Активность фактора свертывания крови II Активность фактора свертывания крови V Активность фактора свертывания крови VII Активность фактора свертывания крови X Активность фибриназы (фактор XIII) Коагулограмма (тромбогенный риск) Протромбиновое время (с МНО) Фибриноген Активированное время рекальциф Активированное парциальное тро Тромбиновое время Растворимые фибрин-мономерные Содержание Д-димера Спектр анализов лаборатории гематологии ИДЦ с учетом гомеостатических методов

  24. TGA-анализ – универсальный метод оценки тромбогенного потенциала гемостаза • Диагностика тромбофилий • Диагностика гемофилий • Мониторинг противо-гемофилийной терапии для пациентов с наличием ингибитора фактора VIII • Мониторинг антикоагулянтной терапии, направленной на ингибирование тромбина и фактора Xa(гепарин)

  25. CEVERON-ALPHA для 4 методов анализа: • - коагулометрия АЧТВ, ПВ, ТВ, Фибриноген, Протеин С, ВА, дефицит факторов свертывания, мутация Лейдена и другие. • - фотометрияС1-ингибитор, FVIII, Протеин С, АТ-III и другие. • - турбидиметрияД-димер, ВА, С-реактивный белок и другие. • - флуориметриякинетика образования эндогенного тромбина (для модификации Ceveron TGA) • Автомат CEVERON-ALPHA TGA позволяет проводить уникальный флуориметрический TGA-анализ • 360/430 нм • Длины волн фотометрического блока:405, 570, 630 и 740 нм • Скорость проведения анализов на CEVERON-ALPHA до 70 образцов/час (ПВ) (Стационар на 300-400 больных)

  26. Спасибо за внимание!

More Related