Ana Luiza Berwanger da Silva Cássia Gomes da Silveira Melissa Pacheco do Nascimento Tamara Azambuja da Silva Monitora or

1. FUNDAÇÃO FACULDADE FEDERAL DE CIÊNCIAS MÉDICAS DE PORTO ALEGRE DEPARTAMENTO DE CIÊNCIAS MORFOLÓGICASDISCIPLINA DE GENÉTICA BÁSICANeurofibromatose tipo 1: do genótipo ao fenótipo Ana Luiza Berwanger da Silva Cássia Gomes da Silveira Melissa Pacheco do Nascimento Tamara Azambuja da Silva Monitora orientadora: Carolina Dutra

2. INTRODUÇÃO • FACOMATOSES Doenças neuroectodermais que envolvem a pele e/ou os olhos, SN e um ou mais sistemas do corpo • Peculiaridade: Hamartomas e outros tumores • História natural e manejo semelhantes

3. QUATRO FACOMATOSES CLÁSSICAS • NF1 • NF2 Genes supressores • Esclerose Tuberosa de Tumor • Síndrome de von Hippel-Lindau

4. NEUROFIBROMATOSES • Tecidos derivados da Crista Neural 1os afetados Doença de von Recklinghausen • Extrema heterogeneidade Nova • Clonagem dos genes específicos classificação

5. HISTÓRICO - Neurofibromatoses • Séc.:XIII mais antigo portador de NF: Heinricus (Áustria) • 1793 Tilesius: 1a descrição de Tu fibrosos múltiplos da pele “wart man” • 1882 Frederich D. von Recklinghausen identificou NF como entidade nosológica individualizada • Séc.: XIX Joseph Carey Merrich - “Homem Elefante” • 1987 Barker et al. e Sezinger et al. Mapearam os genes da NF1 (cromossomo 17) e da NF2 (cromossomo 22)

6. NF1 -“Neurofibromatose Periférica ou Doença de von Recklinghausen” • Doença autossômica dominante • Alto grau de variabilidade da expressão clínica • Penetrância 100% • Expressividade relacionada à idade

7. EPIDEMIOLOGIA • Distúrbio genético dominante mais freqüente • 1:3.000 a 1:5.000 nascidos vivos • 50% dos casos representam mutações novas • Taxa de mutação para o gene NF1 = 1/10.000 NV

8. EPIDEMIOLOGIA • Mais de 80% das novas mutações são de origem paterna exceto deleções amplas (5%) • Não foi estabelecida relação: Idade paterna X Mutações novas

9. EPIDEMIOLOGIAIdade • Prevalência > em jovens  morte precoce dos adultos  subinvestigação dos pacientes com idade mais avançada • Incidência mundial • Sexo masculino = feminino

10. EPIDEMIOLOGIA • Raça  glioma óptico Raça branca  Tu carcinóide Raça negra • Manifestações clínicas  com a idade • Taxa de fertilidade é 1/2 valor normal (< homens)

11. CLÍNICA • Expressão clínica variável múltiplos sistemas orgânicos • 3 principais manifestações:  Neurofibromas cutâneos 90%dos  Manchas café-com-leite pacientes  Nódulos de Lisch durante a puberdade

12. CLÍNICA CRESCIMENTO • Não há complicações pré-natais • 1/3 apresentam retardo de desenvolvimento pós-natal • Macrocefalia • Puberdade precoce Neurofibromas • Alta estatura Plexiformes

13. CLÍNICA DESENVOLVIMENTO E COMPORTAMENTO • Retardo mental (4 a 8%)  grande deleção no gene NF1 ( genes contíguos ? ) • Déficit de Aprendizagem  orientação visoespacial  memória a curto prazo

14. CLÍNICA MANCHAS CAFÉ-COM-LEITE • 1ªs manifestações a aparecer  durante os 1ºs 2 anos de vida • 0,5 a 50 cm diâmetro • Coloração Raça Exposição solar • EFÉLIDES

15. MANCHAS CAFÉ-COM-LEITE EFÉLIDES

16. CLÍNICA NÓDULOS DE LISCH • sinal patognomônico • Inofensivos e assintomáticos • Infância • Exame lâmpada de fenda •  com a idade • Úteis para confirmação diag. em pctes sem HF

17. CLÍNICATUMORES NEUROFIBROMAS  Tu benignos derivados das bainhas nervosas  Disseminados  Idade adulta/progressivos • Neurofibromas Dérmicos  cutâneos ou subcutâneos  pequenos e discretos

18. CLÍNICA  etiologia e patogênese ñ compreendidas  níveis neurofibromina etapa necessária, mas não suficiente • Neurofibromas Plexiformes  Tu grandes e amorfos  Início da vida  Propensão à malignidade

19. NEUROFIBROMAS DÉRMICOS

20. NEUROFIBROMAS PLEXIFORMES

21. CLÍNICA TU MALIGNOS PERIFÉRICOS DE BAINHA NERVOSA • = neurofibrossarcomas • um dos principais tu encontrados • 2-4% provêm de N.plexiformes • forma agressiva c/ alto índice de Mtx à distância • prognóstico pobre

22. CLÍNICA TU VIA ÓPTICA • 2º tu mais comum • 15% dos pctes c/ glioma envolvem tu de via óptica • 1/2 sintomáticos • 1ºs anos da infância • não são malignos perda da visão

23. CLÍNICA LEUCEMIA MIELÓIDE JUVENIL CRÔNICA • Associação significativa entre 2 entidades 10% das crianças com LMJC tb possuem NF1 • Homens que herdam NF1 das mães > risco • Único tipo de Tu, cuja oncôgenese consiste: • mutação de inativ. gene NF1 • ativação do gene Ras

24. DIAGNÓSTICO • Clínico • Dificuldades: variabilidade fenotípica • Critérios estabelecidos em 1988 por National Institutes of Health Consensus Development Conference- NIH • 2 ou + características são suficientes p/ estabelecer o diagnóstico

25. DIAGNÓSTICO

26. DIAGNÓSTICO Considerar idade no momento de aplicar os critérios diagnósticos ! • Idade  p/ apresentação clínica • Se HF + tendência de diagnosticar parente c/ apenas 1 sinal clínico • Exames complementares

27. NF1

28. DIAGNÓSTICO MOLECULAR • Viável para apenas algumas famílias • Análise Direta do DNA diag. pré-natal rastreamento de pré-sintomáticos c/ HF + • Estudos de Ligação com Marcadores DNA • FISH »»» microdeleções

29. DIAGNÓSTICO MOLECULAR Protein Truncation Test ( PTT) • Rastreamento de mutações do gene NF1, quando o diag. clínico é duvidoso • Leucócitos (DNA) • Transcrição e tradução in vitro • Eletroforese • DETECTA: Erros que alteram completamente o produto do gene NF1

30. DIAGNÓSTICO PRÉ-NATAL • Recomendado nas gestações c/ um dos progenitores afetados • Análise Direta do DNA mutação identificada na família • Estudos de Ligação nº razoável de familiares afetados - marcadores conhecidos

31. DIAGNÓSTICO DIFERENCIAL Manifestações Cutâneas (manchas café-com-leite) • S. de Russel-Silver • S. de Bloom • S. de Noonan • S. de Watson • LEOPARD • S. de Sotos e Proteus

32. DIAGNÓSTICO DIFERENCIAL Hamartomas • S. de Bannayan-Riley-Ruvalcaba • S. de Carney • S. de Proteus • S. de Maffucci • D. de von Hippel-Lindau • Polipose adenomatosa familiar

33. DIAGNÓSTICO DIFERENCIAL • Neoplasia endócrina múltipla 2B • Schwannomatose • Lipomatose múltipla • Neurofibromatose espinhal familiar »»» neurofibromas para-espinhais Manifestações Esqueléticas • S. de McCune-Albright »» pseudo-artrose na NF1

34. DIAGNÓSTICO DIFERENCIAL Síndrome de Noonan ou Síndrome Neurofibromatose-Noonan ? • Doença autossômica dominante • Manchas café-com-leite S. de Noonan clássica • Manifestações da S. de Noonan variabilidade de NF1 clássica ?

35. DIAGNÓSTICO DIFERENCIAL • Neurofibromatose tipo 2

36. ASPECTOS MOLECULARES • A estrutura do gene NF1 1987 Mapeado na r. pericentromérica do braço longo docromossomo 17 (estudo de ligação) 1990 Isolado pela primeira vez (clonagem posicional) Recentemente Seqüenciado inteiramente e localizado na r. proximal de 17q (17q11.2)

37. GENE NF1 • Compreende mais de 350 kb de DNA • Região cromossômica 17q11.2 • Codifica um RNAm de 11-13 kb • Contém, no mínimo, 59 éxons

38. CROMOSSOMO 17

39. GENES DENTRO DE GENES • 3 genes contidos em um dos íntrons do gene NF1 (íntron 27) EVI2A, EVI2B, OMGP Pseudogene AK3 • Transcrição ocorre no sentido oposto à do gene NF1 (3´ 5´) Mecanismo envolvido na gênese da NF1?

40. GENES DENTRO DE GENES Evento fisiológico normal ! Transcrição  Transcrição EVI2A, gene NF1 EVI2B, OMGP (5´ 3´) (3´ 5´) Eventos independentes que ocorrem em momentos diferentes !

41. GENES DENTRO DO GENE NF1

42. GENES DENTRO DE GENES • Contribuição incerta na gênese da doença. • Função das proteínas codificadas por esses genes, as quais diferem da neurofibromina, permanecem desconhecidas até o momento.

43. GENES DENTRO DE GENES • Contribuição na variabilidade de expressão da síndrome? • Gene EVI2A cérebro, m. óssea, céls. sangue • Gene EVI2B m. óssea, céls. sangüíneas • Gene OMGP codificador da glicoproteína mielina dos oligodendrócitos (OMGP), expressa somente nos oligodendrócitos do SNC.

44. ASPECTOS MOLECULARES • Origem distinta dos tecidos afetados clinicamente • Hipóteses: Não se conhecem as funções dos produtos dos 3 genes contidos no gene NF1 Apenas 10% da neurofibromina possuem função conhecida

45. SPLICING ALTERNATIVO • Splicing remoção de íntrons presentes em meio a regiões codificadoras de genes eucarióticos, gerando um RNAm maduro, que pode ser traduzido em uma proteína funcional. • Formas alternativas de splicing remoção de éxons e/ou permanência de íntrons. • Isoformas do produto do gene NF1 = proteínas muito similares entre si NEUROFIBROMINA

46. SPLICING ALTERNATIVO • 4 formas alternativas de splicing: GRD II no éxon 23a da NF1-GRD 3´ALT no éxon 48a da terminação 3´ 5´ALT1 no éxon 9 5´ALT2 Isoforma específica dos neurônios, contendo o éxon 9a restrita aos neurônios do cérebro, hipocampo, tálamo e corpo estriado

47. EXPRESSÃO DO GENE NF1 • NF1 se expressa em muitos tecidos do corpo • Neurofibromina detectada: cérebro, rim, fibroblastos da pele, leucócitos, baço, pulmão, músculos melanoma, neuroblastoma, timoma, neurofibroma, neurofibrossarcoma, ca cólon e pulmão As células que mais expressam as mutações do gene NF1 são aparentemente derivadas da crista neural.

48. O PRODUTO DO GENE NF1 = A NEUROFIBROMINA • Gene NF1 codificador de uma proteína análoga à Ras-GAP (proteína de ativação GTPase) NEUROFIBROMINA • Peptídeo intracitoplasmático de 240 kDa, com 2818 aminoácidos

49. O PRODUTO DO GENE NF1 = A NEUROFIBROMINA • Promove a hidrólise intrínseca da GTP ligada à Ras • Põe fim à sinalização intracitoplasmática da proliferação celular Regulador negativo da via de transdução de sinal mediada pela Ras • MUTAÇÕES INATIVAÇÃO GENE NF1 SINALIZAÇÃO Ras CRESC. CELULAR

50. VIA DE TRANSDUÇÃO DE SINAL