Download
1 / 22
220 likes | 439 Views
PENGARUH EKSTRAK METANOL DAUN KELOR ( Moringa oleifera ) TERHADAP KADAR CASPASE-9 JARINGAN HEPAR PADA TIKUS WISTAR YANG DIINDUKSI 7,12-DIMETHYLBENZ[a]ANTHRACENE ( DMBA). Elisabet Heidi 0910710065. Pembimbing I : Prof. Dr. dr. M. Rasjad Indra, MS
E N D
PENGARUH EKSTRAK METANOL DAUN KELOR (Moringaoleifera) TERHADAP KADAR CASPASE-9 JARINGAN HEPAR PADA TIKUS WISTAR YANG DIINDUKSI 7,12-DIMETHYLBENZ[a]ANTHRACENE (DMBA) Elisabet Heidi 0910710065 Pembimbing I : Prof. Dr. dr. M. Rasjad Indra, MS Pembimbing II : Prof. Dr. dr. Edi Widjajanto, MS, SpPK(K)
LatarBelakang Kankeradalahpenyebabutamakematiandidunia, yaitu 7.6 jutakematian (sekitar 13% dariseluruhkematian) padatahun 2008 (GLOBOCAN, 2008). Hepatocellular carcinoma (HCC) merupakanpenyebabketigautamakematianakibatkankerdidunia (Roberts et al., 2005). Faktorrisikoutama HCC adalahsirosisnonspesifik (21%), penyakithatiakibatalkohol (16%), infeksi HCV (10%), daninfeksi HBV (5%) (Davila et al., 2004). • DMBA adalah karsinogen poten yang telahbanyakdigunakansebagaikarsinogenprototipe dalam model hewancoba (Paliwal, 2011).
Perubahan-perubahanfisiologisel yang menyebabkanpertumbuhanganasadalahaktivasionkogen, inaktivasi anti-onkogenatau gen supresor tumor, kesanggupanreplikasi yang tidakterbatas, neoangiogensis, invasijaringan, metastasis, melarikandiridari apoptosis (Hanahan & Weinberg, 2000). Apoptosis adalah program kematianselsecaraintrinsik (Cairar˜o & Domingos, 2010). Caspase, sebuahkelompokunikdari protease sistein, dapatberfungsimelaksanakan apoptosis (Thornberry & Lazebnik, 1998). Makonnenet al. (1997) menemukandaunMoringaoleiferasebagaisumberpotensialuntukaktivitas antitumor. Konsentrasiquercetin yang tinggidapatmeningkatkancaspase-9secarasignifikan (Serrano et al., 2006).
RumusanMasalah • Apakah pemberian ekstrak metanol daunkelor(Moringa oleifera) dapat meningkatkan kadar caspase-9 jaringanheparpadatikus wistar yang diinduksi7,12-dimethylbenz[a]anthracene(DMBA)?
KerangkaKonsep • DaunKelor DMBA • ROS • Quercetin • Kerusakan DNA • Mutasi gen p53 • PeningkatanFungsi Bcl-2 • (anti-apoptosis) PelepasanSitokrom c dariMitokondria PembentukanApoptosome • Aktivasi Caspase-9 • Aktivasi Caspase-3 Apoptosis • Hepoatokarsinogenesis
HipotesisPenelitian PemberianekstrakmetanolMoringaoleiferadapatmeningkatkankadar caspase-9 jaringanheparpadatikuswistar yang diinduksi7,12-dimethylbenz[a]anthracene(DMBA).
DefinisiOperasional • Pemberian per oral ekstrak metanol daun kelor (Moringa oleifera) • Jaringanhepar • Tikuswistar yang dinduksi7,12-dimethylbenz[a]anthracene (DMBA) • Kadar caspase-9 dalam jaringan hepar
AlurPenelitian Adaptasi (7 hari) Diet normal + DMBA 10 mg/hari (44 hari) KontrolNegatif (Diet normal 104 hari) • P2 • (Diet normal) • Kelor 40 mg • P3 • (Diet normal) • Kelor 80 mg P1 (Diet normal) Kelor 20 mg • KontrolPositif • (Diet normal) • 60 hari TIkus dibunuh (ketamin) Pemeriksaan kadar caspase-9 dengan ELISA Analisa data
Pengukuran Kadar Caspase-9 dengandouble-antibody enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) • Masukkansampelpadawells pre-coateddenganone RAT CASPASE-9, CASP-9 antibody untukmenangkapanalit yang adapadasolusi, danlakukaninkubasidanprosedurpencucianuntukmembuangsubstansi yang tidakterikat. • Tambahkansecond HRP-conjugated RAT CASPASE-9, CASP-9 antibodyuntukmengikatanalit yang telahtertangkap, diikutidenganinkubasidanprosedurpencucianuntukmembuangsubstansi yang tidakterikatantibodi HRP. • Tambahkansubstrat HRP, inkubasikanuntukdeteksi, kemudianakantimbulwarnabiru. Stop reaksidanwarnaakanberubahmenjadikuningketikastopping solutionditambahkan. Intensitaswarnakuningsecaraproporsionalberkaitandengankonsentrasi RAT CASPASE-9, CASP-9 padasampel (NovaTeinBio, Inc., USA).
GrafikHubunganantaraKelompokPerlakuandan Rata-rata Kadar Caspase-9 (ng/ml) Keterangan: K- 104 hari diet normal K+ 44 hari diet normal + DMBA, 60 hari diet normal P1 44 hari diet normal + DMBA, 60 hari diet normal + kelor 20 mg/ml per hari P2 44 hari diet normal + DMBA, 60 hari diet normal + kelor 40 mg/ml per hari P3 44 hari diet normal + DMBA, 60 hari diet normal + kelor 80 mg/ml per hari
Pembahasan • Kadar caspase-9 padatikus normal adalah 257,25 ng/ml • Pemberian DMBA 10 mg/ml per hariselama 44 harimenyebabkanpenurunankadar caspase-9 menjadi 187,50 ng/ml. Disregulasipadajalur-jalursinyal yang normalnyamengontrolproliferasiseldan apoptosis merupakankarakteristiktahappromosipadahepatokarsinogenesis (Guicciardi & Gores, 2005).
Heparmerupakan organ metabolismesentraldanberperansebagai organ penyimpan. Sel-selheparmelakukanmetabolismebanyaksubtansi yang berpotensitoksik (Al-Athar, 2004). Hepardapatmengeliminasipolisiklikaromatikhidrokarbon (benzo[a]pyrenedan7,12-dimethylbenz[a]anthracene), tetapidapat pula menyampaikanmetabolittoksinkejaringanperifer. (Uno et al., 2004). • Hepatocytegrowth factor (HGF) memilikiperanpentingpadaperbaikandanregenerasiheparpadasaatterjadikerusakan (Gomez-Quiroz et al., 2008; Nakamura & Mizuno, 2010). SecaraIn vivo, HGF adalahsebuahinduktor angiogenesis, invasi, dan metastasis darisel tumor (Saijoet al., 2002).
Namun, setelahpemberian DMBA dihentikandandigantidenganpemberiankelordengandosisberbedaselama 60 hariterjadipeningkatankembalikadar caspase-9 menjadi 196,00 ng/ml padapemberian 20 mg/ml kelor per hari, 269,25 ng/ml padapemberian 40 mg/ml kelor per hari, dan 257,50 ng/ml padapemberian 80 mg/ml kelor per hari. • Peningkatankadar caspase-9 disebabkanolehpemberianekstrakmetanoldaunkelor yang mengandungflavonoid yang dapatmemediasifungsifisiologi yang berhubungandengansupresikanker (Mahmoudet al., 2000).
Quercetin (merupakankelompokflavonoid yang terkandungdalamMoringaoleifera) menghambatpertumbuhanseldanpembentukankoloni (Kim et al., 1993; Gill et al., 1994) denganmensupresiberbagaiprosesterkait tumor, yaitustresoksidatif, proliferasi, dan metastasis (Kim dan Jang, 2009). • Quercetinjugamenyebabkandownregulateprotein anti-apoptotikdarikeluarga Bcl2 (Bcl-xLdan Bcl-2) danupregulateanggota pro-apoptotik (Baxdan Bad) (Chang et al., 2005; Vijayababuet al., 2005) yang menyebabkandisfungsimitokondriasehinggaterjadikebocoransitokrom-c darimitokondria, yang selanjutnyamengaktivasi caspase-9 (Antonssonet al., 2001).
Kesimpulan • Pemberianekstrak metanol daun kelor (Moringa oleifera) dapatmeningkatkankadar caspase-9 jaringanheparpadatikuswistar yang diinduksi7,12-dimethylbenz[a]anthracene(DMBA). • Dosis optimal ekstrak metanol daun kelor (Moringa oleifera) yang bermanfaat meningkatkan kadar caspase-9 jaringanheparpadatikuswistar yang diinduksi DMBA yang didapatdaripercobaanadalah 40 mg/ml per hari.
