Az allergiás betegségek diagnosztikájának in vitro laboratóriumi módszerei

1. Az allergiás betegségek diagnosztikájának in vitro laboratóriumi módszerei Sipka Sándor http://rimm.dote.hu

2. a.) Hiperszenzitivitás Kóros állapot, amiben olyan külső ingerek okoznak betegség-tünetet az érintett személyeknél, amik másoknál ezt nem hozzák létre. b.) Allergia Hiperszenzitivitási reakció, amit immunológiai mechanizmusok hoznak létre. c.) Atopia Olyan személyes vagy öröklött tendencia, ami fokozott IgE produkciót eredményez kis dózisú allergénekkel szemben, amik főként fehérjék, és amik kiváltják az asztma rhinoconjunctivitis vagy eczema/dermatitis tüneteit.

3. Az allergiás eredetű kórképek l a gyermekkori asthma bronchiale esetek túlnyomó többsége l a szezonális és nem szezonális allergiás nátha l a szezonális és ritkábban, egész éven át tartó allergiás conjunctivitis l az atópiás dermatitisek különböző megjelenési formái l az urticaria és az angioneuroticus oedema l az ételallergia bizonyos típusai l a rovarcsípés allergiák l egyes gyógyszerérzékenységek l az anaphylaxiás shock l neuroallergiás kórképek l extrinsic alveolitisek (részben)

4. Az allergiás megbetegedések klinikai beosztása Légúti allergiás megbetegedések: rhinitis asthma bronchiale, stb. Bőrgyógyászati allergiák: atopiás dermatitis urticariák ekcémák stb. Immunkomplex megbetegedések: IC depozíció arthus reakció (IC-PMN-proteáz, nekrózis) vasculitis allergica stb. Táplálék allergiák A szem allergiás megbetegedései Gyógyszerallergiák

5. Johansson et al. Hypersensitivity Allergic hypersensitivity (immunologic mechanism defined or strongly suspected) Nonallergic hypersensitivity (immunologic mechanism excluded) IgE-mediated Not IgE-mediated T cell:e.g.,contact dermatitis, celiac Nonatopic Atopic Insect sting Eosinophil:e.g., gastroenteropathy Helminths IgG-mediated:e.g.allergic alveolitis Drugs Other Other

6. Immunológiai reakciók Az allergiás gyulladások típusai I. típusú reakció: IgE mediált allergiás reakció II. típusú reakció: IgG és IgM indukált citotoxikus reakció III. típusú reakció: immunkomplexek által okozott szövetkárosodások IV. típusú reakció: Th1 limfociták által kiváltott „késői típusú” gyulladás

7. I.típusú allergiás reakció: - IgE mediált reakció - „azonnali” (az allergénnel való találkozás után 4 órán belül jelentkező) reakció - hízósejtekből, basofil és eozinofil sejtekből, makrofágokból és trombocitákból felszabaduló mediátorok okozzák a tüneteket Meditárok: hízósejtek/bazofilokeozinofilokmakrofágoktrombociták Hisztamin, triptáz ECP proteázok szerotonin PGD2, LTC4 MBP PGD2, PGE2 hisztamin PAF szabad gyökök TxA2, LTB4 TxA2 IL-1, IL-4, IL-5 LTC4, PAF LTC4, PAF szabad gyökök TNFalfa, IFNgamma IL-5 IL-1, TNF szabad gyökök Allergének: Gyógyszerek (penicillin, stb.) Inhalatív allergének: pollenek, (parlagfű /Ambrosia elatior/, üröm stb.) állati szőrök (macska, kutya, stb. ) házipor atkák gombák (penész, bőr stb) textil/gyapjú Rovarok: háziméh, darázs stb. Nutritív allergének: tej, tojás, szója stb.

8. Anaphylaxia: • Életveszélyes állapot, amit ezen mediátorok hirtelen, nagy mennyiségű keringésbe, bőrbe, tüdőbe, gasztrointesztinális rendszerbe kerülése hoz létre. • Két forma: a. -IgE mediált forma • b. -nem IgE (komplement, egyéb faktor)mediált • Laboratóriumi diagnosztika: • Szérum össz-IgE meghatározás (nefelometria, turbidimetria) • Allergén specifikus IgE (RAST, ELISA, FIA, dot-blot technika) • Aktivitás mérés: szérum triptáz • ECP szint mérés • Vérkép (eozinofila) vizsgálat • In vivo provokációs tesztek: bőrpróbák

9. II. típusú allergiás reakció: Mechanizmus: IgM és IgG által kiváltott citolitikus és citotoxikus, szövetkárosító folyamatok - klasszikus komplementreakció sejtlízissel - aktivált C3 aktiválja a PMN, Eo, makrofág/Mo sejteket - IgG kötődés effektor (K, trombocita, PMN, Eo, makrofág/Mo) sejtekhez Allergének: gyógyszerek: kinin, furosemid, aranysó, indomethacin, szulfonamidok, szalicilátok, kloramphenicol Laboratóriumi diagnosztika: - komplement aktiválódás mérés - PMN, Eo, makrofág/Mo aktiválódás kimutatás - ADCC

10. III. típusú allergiás reakció: Mechanizmus: immunkomplexek (IC) által okozott szövetkárosodások IC lerakódás a keringésben IC lerakódás a szövetekben Allergének: Gyógyszerek: antibiotikumok, benzotiazin, hidantoin Baktériumok: Streptococcus, stb. Vírusok: hepatitis B, C, stb. Laboratóriumi diagnosztika: IC mérés szérumban Komplement faktor és aktivitás mérés szérumban Szövettan, IC kimutatás mikroszkóposan

11. IV. típusú allergiás reakció Mechanizmus: Th1 limfociták citokinjei által kiváltott, „késői típusú” gyulladás, ami az allergén expozíció után 12-24 óra múlva alakul ki. Formái: Kontakt túlérzékenység: Hapten-carrier komplex-Langerhans sejtek- Th1 sejtek, citokinek, egyéb mediá- torok (IC), Antigének:nikkel, perubalzsam, illóolajok, Hg vegyületek, festékek, gyógyszerek, kozmetikumok, stb. Tuberkulin típusú reakció: Mononukleáris (limfocita-monocita) sejtinfiltrátum az antigén bejutás helyén Antigén: különböző baktérium fehérjék vagy kémiai anyagok (cirkórium, be- rillium), A transzplantációs immunreakció hasonló mechanizmusú Granulomás reakció: Makrofágokban, monocitákban megtapadó intracelluláris kórokozók (Mycobacterium, lepra, Listeria, stb.) vagy egyéb idegen anyagok (talkum, berillium, stb.) hozzák létre hosszú idő alatt: „óriássejtek” képződnek, miket epotheloid sejtek vesznek körül Laboratóriumi diagnosztika: - hisztológia (mononukleáris sejtekkimutatása) - antigén indukált limfocita blasztos transzformáció és - citokin termelés mérés

12. KÉRDŐÍV (A leggyakoribb allergének a klinikai gyakorlatban) Név: Munkahely: Beosztás: Város: Ország: Dátum: …………….

13. KÉRDŐÍV (folytatás)

14. Keresztreagáló allergének Nyír alma, sárgarépa, burgonya, zeller, meggy, körte, mogyoró Parlagfű sárgadinnye, görögdinnye, banán, uborka Fekete üröm zeller, sárgarépa, mustár, ánizs Tehéntej kecsketej, birkatej, marhahús Földimogyoró dió, szója, zöldborsó, zöldbab, lencse Lencse földimogyoró, szója

15. Legújabb irányzatok I. Specifikus immunterápia alkalmazása, ahol lehetséges II. Allergén „kerülés” megszervezése és megtanítása III. A legkorábbi diagnózis felállítása és a kezelés megkezdése IV. Az allergia epidemiológiai okainak kutatása világszerte (EK)

16. Az allergia diagnosztikájának fő módszerei I.Típusú reakció: in vivo: kután Prick test in vitro: szérum össz-IgE allergén specifikus IgE allergén specifikus IgG (tej, tojás, szója, stb. csecsemőkorban) hízósejt/bazofil aktivációs termék mérés (triptáz, hisztamin, leukotrién stb.) eozinofil aktivációs termék mérés: (eozinofil kationos protein, ECP) III.Típusú reakció: in vitro: allergén-IgG/IgM komplex kimutatás (ELISA, Ouchterlony) IV.Típusú reakció: in vivo: epikután bőr teszt (kontakt allergén) in vitro: limfocita proliferációs teszt (gyógyszerek)

17. Típusaik: 1. Az allergén szerint: természetes allergén kivonat rekombináns technikával előállított allergén allergén kivonat keverékek 2. Az anti-IgE kimutatás módszere szerint: RIA ELISA FIA KLIA Használhatósági kritériumok: szenzitivitás specificitás pozitív prediktív érték negatív prediktív érték Megadott mértékegység: 1. kU/l 2. allergén specifikus IgE osztály: 0-6 Allergén specifikus IgE meghatározási módszerek

18. SPECIFIKUS IgE POZITIVITÁSI OSZTÁLYOK

19. Problémák • Közös szénhidrát epitopok különböző allergéneken (keresztreakciók) • Nemzetközi standardok hiánya (Pharmacia Ca?) • Minden módszerre külön klinikai értékelés szükséges • Regióspecifikus allergén panellek hiánya • Különböző és nem teljesen átfedő nemzetközi külső kontroll rendszerek • léteznek, ha működnek egyáltalán

20. Allergológiai és Klinikai Szakmai Kollégium (KIASZK) ajánlása: 1.Az allergiára utaló tünetekkel jelentkező beteg kivizsgálását és kezelését csak azok az orvosok végezzék, akik allergológus és klinikai immunológus ráépített szakvizsgával rendelkeznek, vagy az alapszakvizsgájuk szerint belgyógyászok, gyerekgyógyászok, tüdőgyógyászok, bőrgyógyászok, szemészek vagy fül-orr-gégészek. 2. Az anamnézisre épülő első diagnosztikus beavatkozásnak a bőrpróba ajánlott. 3. Az in vitro laboratóriumi tesztek közül a diagnózis felállításához három módszer javasolt azokban az esetekben, melyekben a bőrpróba vagy nem kivitelezhető, vagy eredménytelen: l szérum össz IgE meghatározás, l szérum allergén specifikus IgE meghatározás, l allergén indukált T sejt proliferáció mérés. Az allergiás beteg kivizsgálásának ajánlott folyamata

21. 4. Az in vitro laboratóriumi tesztek végzésének indikációi: l bőrbetegség fennállása, l nincs megfelelő antigén a bőrteszthez, l a bőrteszt eredménye és az anamnesztikus adat eltér egymástól, l a bőrteszttel anaphylaxia provokálható, l a specifikus immunterápia kezdetén és végén, l a beteg fizikális és tudati állapota miatt a bőrteszt nem kivitelezhető, l csecsemőknél a korai szenzitizáció kimutatására (főleg tojás és tej vonatkozásában)! l immunszupprimált állapotban, amikor a gyógyszer nem hagyható el, l epidemiológiai sorozat méréseknél, l minden esetben, mikor bőrteszt nem végezhető, l az allergiás gyulladás súlyosságának kvantitatív jellemzésére. A negatív specifikus IgE eredmény értéke: Nem valószínűsíti az atopiás mechanizmust (étel allergiák!)

22. Az allergénspecifikus IgG mérés értéke A főleg tej, vagy néhány egyéb étel (tojás, szója) fehérje ellen képződött IgG nem atopiás, allergiás mechanizmusra utal. A fokozott bélpermeabilitási állapot jelzője (csecsemőkorban, gyulladás stb.) de a specifikus IgE emelkedéséhez társulva előjele lehet gyermekekben a főleg tehéntejfehérje érzékenység elnyújtottabb, hosszabb fennállásának.

23. Az allergén specifikus in vitro módszerek egyéb formái Bazofil aktivációs tesztek: hisztamin felszabadulás mérés leukotrién felszabadulás mérés CD63 expresszió mérés Limfocita aktivációs tesztek: T sejt proliferációs vizsgálatok citokin termelési vizsgálatok nitroblueterazólium (NBT) teszt, gyógyszer allergiákban leukocita migrációs teszt Kvantitatív PCR-IL-4 mérés „Chip” technika rekombináns allergénekkel

24. Az in vitro diagnosztika legaktuálisabb feladata: a tojás és tej irányú szenzitizáltság kimutatása a legkorábbi időszakban még csecsemőkorban.

25. Táplálkozási allergének egy évesnél fiatalabb korú gyermekekben

26. Táplálék allergének 1-6 éves korú gyermekekben

27. Légútiallergének1 évesnél fiatalabb korú gyermekekben

28. Légúti allergének 34 monospecifikus IgE pozitív 1-6 éves korú gyermekekben (a 818-ból)

29. Légúti allergének80 multispecifikus IgE pozitív 1-6 éves korú (a 818-ból)gyermekekben

30. DE OEC III. sz. Belgyógyászati Klinika Regionális Immunológiai Laboratórium