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TALLER DE PRUEBAS BIOQUÍMICAS BÁSICAS UTILIZADAS EN EL LABORATORIO DE MICROBIOLOGÍA

UNIVERSIDAD CENTROOCCIDENTAL “LISANDRO ALVARADO” DECANATO DE CIENCIAS DE LA SALUD DEPARTAMENTO DE MEDICINA PREVENTIVA Y SOCIAL SECCION DE MICROBIOLOGÍA Microbiología Médica I. TALLER DE PRUEBAS BIOQUÍMICAS BÁSICAS UTILIZADAS EN EL LABORATORIO DE MICROBIOLOGÍA. Yudy Aranguren, octubre 2011.

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TALLER DE PRUEBAS BIOQUÍMICAS BÁSICAS UTILIZADAS EN EL LABORATORIO DE MICROBIOLOGÍA

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  1. UNIVERSIDAD CENTROOCCIDENTAL “LISANDRO ALVARADO” DECANATO DE CIENCIAS DE LA SALUD DEPARTAMENTO DE MEDICINA PREVENTIVA Y SOCIAL SECCION DE MICROBIOLOGÍA Microbiología Médica I TALLER DE PRUEBAS BIOQUÍMICAS BÁSICAS UTILIZADAS EN EL LABORATORIO DE MICROBIOLOGÍA Yudy Aranguren, octubre 2011

  2. PASOS PARA EL DIAGNOSTICO: 1.- MUESTRA: 2.- DIRECTO: Coloraciones: Gram 3.- CULTIVO 4.- PRUEBAS BIOQUIMICAS

  3. PRUEBAS BÁSICAS PARA EL DIAGNÓSTICO MICROBIOLÓGICO DE COCOS GRAM POSITIVO

  4. Son catalasa positivo: PRUEBA DE LA CATALASA • La determinación de la presencia de catalasa • Se pone en contacto una pequeña cantidad de cultivo bacteriano de • 24-48 horas de incubación, con en peróxido de hidrógeno (H2O2) al 3%. • La liberación de O2 indica la presencia de catalasa. • H2O2 + catalasa = H2O + ½ O2 Son catalasa negativo:

  5. PRUEBA DE LA REDUCCIÓN DE NITRATOS A NITRITOS • Permite determinar la capacidad de un organismo de reducir el nitrato en nitritos por algunas especies bacterianas que poseen la enzima nitrato-reductasa • Se agrega a un cultivo en caldo unas gotas de: - Reactivo A: solución de dimetilnaftilamina 0,6%. - Reactivo B: solución de ácido sulfanílico 0,8%. • Se observa un cambio de color: • Positivo: Rojo ladrillo • Negativo: Sin cambio de color + -

  6. FERMENTACIÓN DE CARBOHIDRATOS • La fermentación de un carbohidrato (azucares) por un microorganismo en particular ayuda a su identificación. • La acidez que se produce en el medio se pone en evidencia a través del cambio de color de un indicador de pH + - • Se puede evidenciar la producción de gas AGAR SALADO MANITOL

  7. PRUEBAS SEGUNDARIAS 1.- COAGULASA 2.- SENSIBILIDAD O RESISTENCIA A LA NOVOBIOCINA

  8. COAGULASA POSITIVA NEGATIVA Staphylococcus aureus Staphylococcus epidermidis Staphylococcus saprophyticus + - PRUEBA DE LA COAGULASA • La determinación de la presencia de la enzima coagulasa: • Se pone en contacto una pequeña cantidad de cultivo bacteriano con plasma con anticoagulante e incubar 4 horas a 37ºC. - +

  9. PRUEBA DE SENSIBILIDAD

  10. SENSIBILIDAD A LA NOVOBIOCINA SENSIBILIDAD A LA NOVOBIOCINA SENSIBLE-SIN CRECIMIENTO RESISTENTE-CON CRECIMIENTO Staphylococcus epidermidis Staphylococcus saprophyticus NOVOBIOCINA NOVOBIOCINA Sin crecimiento alrededor del disco de Novobiocina Con crecimiento alrededor del disco de Novobiocina

  11. CRECIMIENTO EN ALTAS CONCENTRACIONES DE SAL COCOS GRAM POSITIVOS • Género Staphylococcus crece a altas concentraciones de sal (7% NaCl) + - • Género Streptococcus NO crece a altas concentraciones de sal (7% NaCl) • Género Enterococcus crece a altas concentraciones de sal de 6,5% per o NO a7% NaCl

  12. CRECIMIENTO EN ALTAS CONCENTRACIONES DE SAL Agar Salado Manitol: Crecimiento con o sin fermentación de manitol 1.- GéneroStreptococcus no crece a 7% de NaCl 2.- Staphylococcus epidermidis y Staphylococcus saprophyticus Crecen y NO fermentan el manitol (color rosado del medio) 3.- Staphylococcus aureus crece y fermenta el manitol (color amarillo del medio)

  13. PATRONES DE HEMÓLISIS

  14. ALFA BETA GAMMA PATRONES DE HEMÓLISIS AGAR SANGRE ALFA: Lisis parcial de los glóbulos rojos BETA: Lisis total de los glóbulos rojos GAMMA: Sin lisis

  15. Staphylococcus aureus Streptococcus agalactiae Streptococcus pyogenes PRUEBA DE CAMP Prueba de CAMP: Las especies del genero Streptococcus del grupo B ( BETA HEMOLITICOS) produce un factor que aumenta la beta hemólisis de una cepa indicadora de Staphylococcus aureus.

  16. AUTOEVALUACIÓN TIPO DE HEMÓLISIS NO HEMOLITICO

  17. CLASIFICACION DE LANCEFIELD PARA ESTREPTOCOCOS BETA HEMOLITICOS http://www.youtube.com/watch?v=Zks-2AZuZ1Y&feature=related

  18. + Partículas de látex cubiertos de anticuerpos específicos Extracto soluble de la pared celular por acción enzimática CLASIFICACION DE LANCEFIELD PARA BETA HEMOLITICOS

  19. PRUEBA DE SENSIBILIDAD A LA BACITRACINA Pruebas para diferenciar estreptococos Beta hemolíticos (Grupo A y Grupo C) Con crecimiento alrededor del disco de Bacitracina Sin crecimiento alrededor del disco de Bacitracina

  20. PRUEBA DE SENSIBILIDAD A LA OPTOQUINA Pruebas para diferenciar Streptococcus pneumoniae y otros estreptococos Alfa hemolíticos (Streptococcus mitis) Streptococcus pneumoniae Streptococcus mitis DISCO DE OPTOQUINA DISCO DE OPTOQUINA Sin crecimiento alrededor del disco de Optiquina Con crecimiento alrededor del disco de Optiquina

  21. PRUEBA DE SENSIBILIDAD A BILIS Pruebas para diferenciar Streptococcus pneumoniae y otros estreptococos Alfa hemolíticos (Streptococcus mitis) StreptococcusmitisNO lisado en presencia de Bilis Streptococcuspneumoniae lisado en presencia de Bilis

  22. PRUEBAS BÁSICAS PARA EL DIAGNÓSTICO MICROBIOLÓGICO DE BACILOS GRAM NEGATIVOS

  23. PASOS PARA EL DIAGNOSTICO: 1.- MUESTRA: 2.- DIRECTO: Coloraciones: Gram 3.- CULTIVO 4.- PRUEBAS BIOQUIMICAS

  24. FERMENTACIÓN DE LACTOSA EN MEDIO MAC CONKEY

  25. PRUEBA DE MOVILIDAD • Permite conocer si las bacterias en estudio son móviles o no, eso ayuda en el proceso de clasificación • Se realiza una siembra pinchando el medio con la aguja bacteriológica, y tras incubar 24 h, se observa si se ha producido crecimiento entorno a la zona inoculada.

  26. PRUEBA DEL INDOL • Se cultiva la especie en estudio en un caldo rico en triptofano para que se produzca el Indol • Se agrega al cultivo tres gotas del reactivo de Kovack • (P-dimetil-aminobenzaldehido ) • Se determina la presencia de Indol a través de la formación de un • anillo rojo en la superficie del caldo - +

  27. PRUEBA DEL CITRATO Determina si el organismo bacteriano en cuestión se desarrolla o no en un medio que contiene citrato como única fuente de carbono. Medio citrato de Simmons

  28. KLIGLER: Agar triple azucar hierro

  29. PRUEBA DE LA OXIDASA • Prueba secundaria • Permite conocer la presencia o ausencia del “citocromo C” en bacterias y es una característica fisiológica muy utilizada en taxonomía • Se toma una pequeña cantidad de cultivo bacteriano de 24-48 horas de edad y se transfiere a un trozo de papel filtro previamente embebido en n,n-dimetil p-fenilendiamina • Este reactivo es rápidamente transformado a un producto oxidado de color púrpura dentro de 30 segundos en presencia de citocromo oxidasa. Prueba de oxidasa

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