200 likes | 450 Views
Organizacja i ekspresja genomu eukariotycznego. Katarzyna Kozioł Magdalena Machowska Katarzyna Piekarowicz (Pracownia Białek Jądrowych, p.41c, e-mail: koziol@ibmb.uni.wroc.pl). Cel ćwiczeń:. Analiza procesu dekondensacji chromatyny
E N D
Organizacja i ekspresja genomu eukariotycznego Katarzyna Kozioł Magdalena Machowska Katarzyna Piekarowicz (Pracownia Białek Jądrowych, p.41c, e-mail: koziol@ibmb.uni.wroc.pl)
Cel ćwiczeń: • Analiza procesu dekondensacji chromatyny • Analiza procesu wiązania białek do chromatyny podczas dekondensacji • Przygotowanie preparatów umożliwiających analizę morfologii jąder komórkowych w różnych stadiach rozwojowych muszkiowocowej • embrion • larwa • poczwarka • jajniki • Analiza morfologii jąder komórkowych w różnych fazach cyklu komórkowego w komórkach w hodowlach komórkowych
METODA IN VITRO NUCLEAR ASSEMBLY • - ANALIZA DEKONDENSACJI CHROMATYNY • ORGANIZACJA CHROMATYNY • REPLIKACJA • BADANIE MITOZY • WPŁYW WYBRANYCH BIAŁEK NA PROCESY • DEKONDENSACJI I ODTWARZANIA OTOCZKI -chromatyna -ekstrakt - energia ODTWARZANIE JĄDER KOM.: - ekstrakt z oocytów Xenopus laevis (żaba szponiasta) - LSS - DSP odbłoniona chromatyna ze spermy Xenopus (demembranated sperm chromatin) - inhibitor coctail - energy mix: ATP, PC (fosforan kreatyniny), PCKinase
Odtwarzanie jąder komórkowych (chromatyna i otoczka) http://www.jove.com/details.php?id=908
Populacje pęcherzyków mitotycznych NEP-B i NEP-A Widoczne pęcherzyki błonowe asocjujące z chromatyną Widoczne prekursory porów i kompletne kompleksy porowe.
Molecular Biology of the Cell Alberts,B i wsp., (1994) LAMINY -wraz z innymi białkami otoczki jądrowej tworzą dynamiczny szkielet białkowy zapewniający mechaniczną podporę otoczki jądrowej -kontrolują umiejscowienie kompleksów porowych w obrębie otoczki jądrowej -regulują organizację przestrzenną chromatyny, stanowią miejsce kotwiczenia domen chromatynowych -wpływają na replikację, transkrypcję, splicing -zaangażowane są w procesy starzenia, różnicowania i apoptozy TYPY LAMIN (ludzkie) -B: (LMNB1) - B1 (LMNB2) –B2, B3 -A/C (LMNA) , A, C,C2, A10
Wpływ emeryny na odtwarzanie struktury otoczki jądrowej in vitro
Przygotowanie preparatów umożliwiających analizę morfologii jąder komórkowych w różnych stadiach rozwojowych muszkiowocowej
Budowa jajników u Drosophila melanogaster Jajniki Cewka jajnikowa (owariola)
Analiza dystrybucji obu typów lamin w embrionach D.melanogaster przy użyciu mikroskopii konfokalnej.
Analiza morfologii jąder komórkowych w różnych fazach cyklu komórkowego
Formowanie wrzeciona podziałowego The CellA Molecular ApproachGeoffrey M. Cooper Boston University Second EditionSinauer Associates, Inc.,ISBN 0-87893-106-62000
Dziękujemy za uwagę! Do zobaczenia na ćwiczeniach. • Zaliczenie: • - kolokwium ( termin do uzgodnienia) • praca na ćwiczeniach • obecność