Praktiká 7 - Pseudomonas, Bordetella, Bacillus

1. Praktiká 7-Pseudomonas, Bordetella, Bacillus • Nozokomiálne nákazy • Čierny kašeľ • Antrax a bioterorizmus • Mikroskopický preparát - podľa Grama - Ps. aeruginosa, Bacillus anthracis a Bacillus cereus, podľa Wirtz Coonklina Bac. Anthracis • Kultivácia Ps. aeruginosa na KA a Endovej, Bordetella pertussis na Bordet Gengou, B. anthracis a B. cereus na KA • Biochemické vlastnosti Ps. Aeruginosa • Ascoliho termoprecipitačná reakcia • Kultivačné osobitosti B. pertussis • ATB terapia Ps. aeruginosa

2. Bacilus antracis spóry a veget.bb

5. Nozokomiálne nákazy • Nemocničná nákaza - infekcia, ktorá vznikla v súvislosti s pobytom v nemocinici alebo diagnostickým, terapeutickým alebo preventívnym zákrokom.Nemusí sa prejaviť pri hospitalizácii a nie každá infekcia, ktorá sa prejaví v nemocnici je NN • Faktory vzniku - vnímavosť(vek, sprevádzajúce ochorenie, chirurgické zákroky, terapia - ATB, imunosupresia, ožarovanie, neživý rezervoár - katetre) • Mikroorganizmy • Cesty prenosu - nepriamo (inhalácia, ingescia, inokulácia) , priamo (dotykom chorej kože alebo sliznice so zdravou) • Prevencia - organizačné opatrenia, stavebné úpravy, zásobovnie potravinami, ošetrovateľká technika, aseptické a antiseptické prístupy, upratovanie, dezinfekcia a sterilizácia, izolácia, monitorovanie, surveillance, úloha laboratória) • ATB terapia

6. Úloha mikroorganizmov u NN • Staphylococcus aureus - problematika per secundam hojacich sa rán (70. roky). Virulencia, schopnosť kolonizovať, nástup rezistencie - MRSA - meticilin rezistentné stafylokoky (80. roky) • G- paličky (60% NN) - močové infekcie, respiračné infekcie, infekcie rán a GIT • Podmienečne patogénne mikroorganizmy - Ps. aeruginosa (Nemocničné prostredie – v potravinách, rezané kvety, uteráky, mopy, respiračné prístroje, dezinfekčné roztoky Perzistentné nosičstvo menej ako 6% u zdravých, 38% u hospitalizovaných, 78% imunokompromitovaných) a ostatné nefermentujúce G- paličky - Acinetobacter, Stenotrophomonas maltophilia, Burkholderia cepacia… - prítomné v prostredí (Legionella pneumophila - klimatizácia) • PK negatívne stafylokoky - kolonizujúce umelý materiál • Vírusy - krvou prenosné HIV, VHB, VHC, CMV….

7. ATB terapia u nozokomiálnych nákaz • Nadmerné podávanie - vznik rezistencie a multirezistencie (selekčný tlak a prenos rezistencie v nemocničnom prostredí), výskyt toxických vedľajších účinkov, ekonomická záťaž, likvidácia fyziologickej mikroflóry • Racionálne podávanie - zastavenie šírenia NN • Profylaxia zameraná na anerobné infekcie - perioperačná príprava pri GIT a gynekologických zákrokoch, pri inštrumentálnom vyšetrení u pacientov s bakteriúriou • ATB prehľady - monitorovanie stavu rezistencie • Reštriktívna politika - dočasný zákaz používanie niektorých ATB - zameraná na zastzavenie šírenia rezistencia • Rotácia atb - periodické zmeny aplikácie ATB - znižujú selekčný tlak • Kombinácia atb - likvidujú možné rezistentné mutanty, široký záber na viaceré mi druhy

8. Čierny kašeľ • Klinické syndrómy Inhalácia infekčných kvapôčiek Patogenéza – expozícia baktérii a jej prichytenie na riasinkový epitel bronchialneho stromu, produkcia toxínu a vznik tkanivového poškodenia + systémová toxicita – katarálne štádiu (1-2 týždne) - sy chrípkovitého ochorenia – paroxyzmálne štádium (2-4 týždne) - zničenie riasinkového epitelu – paroxyzmy kašľa – reštrikcia dých.ciest zvracanie, lymfocytóza – rekonvalescentné štádium – zmenšovanie paroxyzmov - sekundárne komplikácie Prevencia Celobunková vakcína - komplikácie? ( kombinovaná s difterickou, tetanickou a Hib alebo VHB vakcínou). Acelulárna vakcína – imunogenicita ? Liečba-podporná, ošetrovanie a dohľad, ATB nemusia zlepšiť stav – intoxikácia a deštrukcia epitelu, - ERY -eradikácia baktérie, redukcia infekčnosti

9. Anthrax a bioterorizmus • Veľmi virulentný (toxín) • Nákaza inhaláciou, ingesciou aj kontaktom - šírenie vzduchom - aerosol, bomby, vodou • Rezistentné na vonkajšie podmienky - široké teplotné rozhranie (14-42*C). Spóry - prežívajú vysušenie

10. Mikroskopia • Mikroskopický preparát - podľa Grama - Ps. aeruginosa,: G- hrubá palička • G+ hrubá palička , dlhé reťaze paličiek s cetrálne uloženými spórami vyplňujúcimi celý priemer baktérie - prejasnenenie (spóry): Bacillus anthracis. V preparáte z tkaniva sú bez spór. • Bacillus cereus: G+ palička bez púzdra, pohyblivá • podľa Wirtz Coonklina (praktiká 4 LS) - dôkaz spór Bac.anthracis

11. Kultivácia • Ps. aeruginosa na KA - mukózne šedavé kolónie s kovovým leskom a pigmentom s charakteristickou vôňouProdukcia púzdra a difuzibilných pigmentov - pyocyanin • B. anthracis na KA - aeróbna, fakult. anaeróbna palička,a t.: 14- 45*C, malé šedavé adherujúce kolónie, paličky sa ukladajú paralelne a tak aj rastú - obraz caput medusae, kolónie s vlnovitými okrajmi. Opúzdrené kolónie sú jemné, neopúzdrené - hrubé, Staršie kolónie vyrastajúce v aeróbneom prostredí obsahujú spóry .- suchý vráskavý vzhľad. Rast na pôde s PNC - vo forme šnúry perál • B. cereus na KA - netvorí púzdro šedavé kolónie

12. Kultivácia Bordetella pertussis • Veľmi náročná, aeróbna, predĺžená kultivácia, produkuje toxické splodiny, ktoré sa musia adsorbovať - aktívne uhlie, škrob alebo vysoká koncentrácia krvi - Bodette Gengou pôda • Platne s vysoko naliatym agarom, zabeistené proti vyschnutiu • Priesvitné kolónie (B. parapertussis - hnedý pigment)

13. Biochemické vlastnosti Ps.aeruginosa • minimálne nutričné nároky, termotolerantné 4*- 42* C, rezistnecia na ATB and dezinfekčné látky Nefermentujúce – cytochromoxidáza – dif.dg. (COX test), Hajnova pôda - bez zmeny - celá červená - len dôkaz pigmentu a vône. Na priesvitných pôdach - bledých - zelenkavý pigmen • Primárne oportúnne: faktory virulencie Pilli - adherencia Polysacharidové púzdro – antifagocárne vlastnosti, upevnenie baktérie Endotoxin – LPS sepsa Exotoxin A – najdôležitejší, blokuje proteosyntézu eukaryotických buniek Alkalická proteáza – deštrukcia tkaniva Fosfolipáza C – rozkladá lipidy a lecitín, tkanivová deštrukcia,

14. Ascoliho termoprecipitačná reakcia • Dôkaz toxínu • Nástroje patogenity - púzdro a toxín - obidva majú antifagocytárne vlastnosti , toxín - toxický účinok, CNS, leu. Fagocytované spóry nie sú zničené • Toxín - 3 súčasti : EF - edematogénny faktor, LF - letálny faktor, protektívny antigén PA • EF+LF - nemajú toxické účinky • LF+PA - letálny, neprodukuje edém • EF+PA - len edém • EF+PA+LT - maximálna toxicita • PA - najimunogénnejší , aj sám • EF, LT samostatne nie sú imunogénne • EF+PA, EF+LT, LT+PA, EF+LT+PA - imunogénne

15. B.pertussis - odber materiálu a kultivácia • Odber z nazofaryngu - na ohybnom drôte, navlhčenom. Kašľacie platne - prerastenie sprevádzajúcej flóry - (KA+aktívne uhlie +ATB, alebo Bordette Gengou) Bordetella pertussis – kultivačne veľmi náročné, virulentné. Pertusický toxín – 2 podjednotky A (aktivna) mnohočetné biologické pôsobenie., B(väzba) Dermonekrotický toxín – vazokonstrikcia, tkanivoé poškodenie Filamentózny hemaglutinín – prichyteni, hemaglutinácia -protektívne Ab ,Adenylát cykláza - toxín – interferencia s imunit.bb. (inhibícia), Tracheálny cytotoxín – ciliostáza, LPS - endotoxin Laboratórna diagnostika Sensitívne na vyschnutie, mastné kyseliny v bavlne odberových súprav sú toxické, neprežíva v bežných transportných médiách, priama inokulácia na Bordet Gengou platne. Vlhká komôrka - prolongovaná inkubácia – 7 dní Serologická diagnostika -Aglutinácia : patientove sérum + komerčný Ag B. pertussis - 2 vzorky v 14 dennom intervale, 4 násobný vzostup titra, konverzia z negat na pozit

16. Citlivosť na ATB u pseudomonád • Liečba - Frustrujúca – imunokompromitovaná obrana hostiteľa, typická ATB rezistencia indukcia ATB inaktivujúcich enzýmov prenos rezistencie prostredníctvom plazmidov Izoláciabez dôkazu ochorenia neindikuje terapeutickú intervenciu • Aminoglykozidy – neúčinné v mieste infekcie (kyslé prostredie v abscesoch) Kombinácia ATB – beta laktámové ( chránené) + aminoglykozidy, Meronem, Imipenem, Sulperazon, Cefoperazon • Prevencia Zábrana kontaminácie sterilných nástrojov a skríženej kontaminácie medzi pacientami. Dekontaminácia násadcov dýchacích prístrojov a prostredia - nozkomiálne kmene JIS a aro Širokospektrálne ATB používať veľmi indikovane – supresia normálnej flóry a prerastenie rezistentných pseudomonád

17. Corynebacterium- patogenéza a imunita • Difterický exotoxín - tox gén môže byť prinesený do baktérie (C. diftérie, C. ulcerans, C.pseudotuberculosis prostredníctvom bakteriofágu - lyzogénna konverzia • A-B protein: B fragment - väzba na povrch bb umožní vstup A fragmentu do bb. A fragment enzymaticky aktívny - blokuje syntézu proteinov- predlžovanie peptidového reťazca na ribozómoch za prítomnosti Fe • Schickov kožný test - dôkaz neutralizujúcich protilátok - i.d. podaním difterického toxínu • Klinický prejav záleží na stave imunity a mieste infekcie: - asymptomatická kolonizácia, mierne respiračné ochorenie, fulminantná diftéria

18. Bacillus antracis • G+ alebo G labilná aeróbna palička, nesporulujúca - v mi obraze útvary ukladajúce sa do dvojic alebo dlhých vinúcich sa reťazí.- caput medusae • Štruktúra a patogénny potenciál Polypeptidové púzdro - in vitro len za špeciálnych podmienok - protilátky proti nemu nie sú protektívne Toxin - 3 antigénne odlišné súčasti - termolabilný protektívny antigén, -letálny faktor - edematogénny faktor účinkujú len v prítomnosti protektívneho antigénu. • Prítomný v pôde a na rastlinách, • Primárne infikuje zvieratá, • Prenos na človeka produktami - vlasy, koža, vlna. • Interhumánny prenos nie je

19. Bacillus antracis • Kožný antrax - po inokulácii - rýchlo progredujúci vred nekróza s masívnym edémom. Neliečený 20% mortalita • Pľúcny antrax - inhalácia - respiračné zlyhanie. Vysoká mortalita aj pri liečbe • Gastrointestinálny antrax – ingescia - veľmi vzácny - hemorhagie, krvácanie, ascites - vysoká mortalita • Diagnostika - mikroskopicky : G+paličky bez spór, nepohyblivé, rastie na neselektívnych pôdach, rýchlo rastúce, adhherujúce kolónie, hemolýza • Terapia - PNC, TTC, CMP, • Očkovanie - reaktívne OL