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维生素 AD 胶丸中维生素 A 含量测定

维生素 AD 胶丸中维生素 A 含量测定. 1 、 目的要求 2 、 实验原理 3 、 试剂与器材 4 、 实验步骤 5 、 注意事项 6 、 思考题. 吉林大学生物基础实验教学中心. 目的要求. 掌握 UV 三点校正法的原理和维生素 A 含量测定的方法。. 实验原理. 本法是在三个波长处测得吸收度，根据校正公式计算吸收度 A 校正值后，再计算含量，故本法称为“三点校正法”。该原理主要基于： （ 1 ） 杂质的无关吸收在 310nm~340nm 的波长范围内几乎呈一条直线，且随波长的增长吸收度下降。

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维生素 AD 胶丸中维生素 A 含量测定

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Presentation Transcript

  1. 维生素AD胶丸中维生素A含量测定 1、目的要求 2、实验原理 3、试剂与器材 4、实验步骤 5、注意事项 6、思考题 吉林大学生物基础实验教学中心

  2. 目的要求 掌握UV三点校正法的原理和维生素A含量测定的方法。

  3. 实验原理 本法是在三个波长处测得吸收度，根据校正公式计算吸收度A校正值后，再计算含量，故本法称为“三点校正法”。该原理主要基于： （1）杂质的无关吸收在310nm~340nm的波长范围内几乎呈一条直线，且随波长的增长吸收度下降。 （2）物质对光吸收呈加和性的原理。即在某一样品的吸收曲线上，各波长处的吸收度是维生素A与杂质吸收度的代数和，因而吸收曲线也是二者的叠加。

  4. 试剂与器材 紫外分光光度仪、刀片、烧杯若干个、维生素AD胶丸（规格1万单位/粒）、环己烷，乙醚等。

  5. 实验步骤 • 精密称取20粒胶丸，破壳取内容物，乙醚洗净胶丸壳并称量得总壳重。 • 精密称取内容物0.0050g左右（9~15单位/ml范围内，精确记录）于50ml容量瓶，用少量环己烷溶解后，用环己烷定容至50ml。再从中取2ml于25ml容量瓶，用环己烷定容至25ml。 • 先在紫外分光光度计下扫描出样品溶液在200~400nm范围内的吸收度曲线，确定最大吸收波长。然后分别在300nm,316nm,328nm,340nm,360nm五个波长下测定吸收度。

  6. 实验步骤 [计算] • ① 求 E1%1cm：由 A=E1%1cm×C×L， 求得E1%1cm=A/（C×L）。 • ② 求效价（IU/g）：效价系指每克供试品中所含维生素A的国际单位数（IU/g）。 即IU/g=E1%1cm×1900。 • ③ 求维生素A占标示量的百分含量： 标示量%=(A×D×1900×W×100%)/ (W×100×L×标示量)×100%。

  7. 实验步骤 [A值的选择] 首先计算吸收度比值（即Ai/A328） ① 如果最大吸收波长在326nm～329nm之间，并分别计算5个波长下的差值，均不得超过±0.02时，则不用校正公式计算吸收度，而直接用328nm处测得的吸收度A328求得。 ② 如果最大吸收波长在326nm～329nm之间，并分别计算5个波长下的差值，如有一个或几个超过±0.02，这时应按以下方法判断：

  8. 实验步骤 • 若A328（校正）与A328的吸收度相差不超过±3.0%，则不用校正吸收度，仍以未经校正的A328求得E1%1cm。 • 若A328（校正）与A328的吸收度相差在 -15%～-3%之间，则以A328（校正）得E1%1cm。 • 若A328（校正）与A328的吸收度相差小于-15%或大于+3%，则不能用本法测定，而应用第二法（皂化法）测定含量。 ③ 如果最大吸收波长不在326nm～329nm之间，也不能用本法测定，而应用第二法（皂化法）测定含量。 • 第一法校正公式：A328(校正)=3.52(2A328-A316-A340)

  9. 实验步骤 • 由扫描结果得最大吸收波长为327.7nm（326~329nm） • 各个差值均不超过±0.02，不需用校正公式。故直接用A328进行计算。 • E1%1cm(328)= A328 /(100×ms/D) =0.746/(100×0.0048/100)=155.42 • 效价= E1%1cm×1900=155.42×1900=295298 • 标示量%=[(A×D×1900×W)/(W×100×L×标示量)] ×100%=(0.746×100×1900×0.08714)/(0.0048×100×1×25000) ×100%=102.9%

  10. 实验步骤 二法： • 方法：精密称取一定量供试品，加氢氧化钾乙醇溶液后煮沸回流，得到的皂化液再经乙醚提取、洗涤、滤过、浓缩和干燥等处理，最后用异丙醇溶解残渣并稀释成每1ml中含维生素A为9~15单位的溶液，在300、310、325、334波长处测定吸光度，并确定最大吸收波长。计算同第一法，换算因子为1830。 • 二法校正公式： A325（校正）=6.815A325－2.555Ａ310－ 4.260A334

  11. 注意事项 ①在含量测定时胶壳要尽量洗干净，避免内容物残留，使粒重尽量准确。 ②由于所取的样品量非常小，所以用于收集样品的小烧杯一定要用溶剂洗涤多次并合并入容量瓶中，容量瓶口也要冲洗使样品全部转入。 ③在测定不同波长下的吸收度时每一次都要用空白液进行调零。 ④维生素A遇光易氧化变质，故操作应在半暗室中快速进行，测定中所用的乙醚，必须不含过氧化物。

  12. 思考题 按下列操作步骤制备供试品溶液，请计算应取胶丸内容物多少克？（已知胶丸内容物平均重量为W） 精密称取胶丸内容物X克，置100ml量瓶中，加环己烷稀释至刻度，摇匀，在精密量取2ml，置另一25ml量瓶中，加环己烷稀释至刻度，摇匀，即得（9~15单位/ml）。

  13. 维生素A的含量用生物效价即国际单位（IU/g）来表示。维生素A的国际单位规定如下：1IU=0.344ug维生素A醋酸酯；1IU=0.300ug维生素A醇。维生素A的含量用生物效价即国际单位（IU/g）来表示。维生素A的国际单位规定如下：1IU=0.344ug维生素A醋酸酯；1IU=0.300ug维生素A醇。 • 每1g维生素A醋酸酯相当的国际单位数为：1×106/(0.344ug/IU)=2907000IU • 每1g维生素A醇相当的国际单位数为： 1×106/(0.300ug/IU)=3330000IU 返回

  14. 换算因子=(IU/g)/ E1%1cm • 换算因子(维生素A醋酸酯) =2907000/1530=1900 • 换算因子（维生素A醇）=3330000/1820=1830 返回

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