X-linked inheritance of Fanconi anemia complementation group B Amom Ruhikanta Meetei og fleiri

1. X-linked inheritance of Fanconi anemia complementation group B Amom Ruhikanta Meetei og fleiri A new gene on the X involved in Fanconi anemia Nazneen Rahman og Alan Ashworth Í Nature Genetics 36; nóvember 2004 Johanna Henriksson Sævar Ingþórsson

2. Fanconi anemia • Fanconi anemia er (oftast) autosomalt víkjandi heilkenni • Ofurnæmni við DNA crosslinking agents • Brothættir litningar, litningaóstöðugleiki • Fæðingagallar • Virkniskerðing í beinmerg (blóðleysi) • Aukin krabbameinshætta

3. Orsökin eru gallar í próteinum sem taka þátt í DNA viðgerð • Hefur 11 complementation groups – 11 þættir taka þátt í ferlinu • Core complex með FANCA og fleiri þáttum sér til þess að FANCL monoubiquitinerar FANCD2 • FANCD2 tekur þátt í viðgerð á DNA með öðrum þáttum, m.a. BRCA2 og RAD51

4. DNA viðgerðaferlið

5. Vandamálið • Ekki var búið að finna gallann sem veldur Fanconi anemia gerð B • Talið var að BRCA2 gæti valdið gerð B • Niðurstöðurnar mótsagnakenndar, þar sem aðeins hafði fundist galli í því geni í einum einstakling með FA

6. Rannsókn Meetei o.fl • Í mass spectrometry fannst 95-kD próteín • Fjölstofna mótefni fann próteinið, sem kallað var FAAP95 (Fanconi Anemia associated protein 95)

7. Immunoblotting með mótefni gegn FANCA og FAAP95 greindi FAAP95, og sýndi að FAAP95 er til staðar í core complex

8. Ef FAAP95 var ekki til staðar í frumu minnkaði monoubiquitinering af FANCD2 • Bendir til að FAAP95 er virkur þáttur í core complex • Í frumum án FAAP95 var til minna af FANCL • Bendir til að FAAP95 er mikilvægt fyrir stöðugleika FANCL

9. FAAP95 er aðallega til staðar í kjarnanum á HeLa frumum • FAAP95 var hinsvegar aðallega til staðar í umfryminu á frumum sem vantaði FANCA • FAAP95 færðist inn í kjarnan ef FANCA var bætt í þessar frumur • Hagar sér svipað og FANCL • Bendir til að FAAP95 tengist Fanconi anemia

10. Genið sem tjáir FAAP95 er staðsett á X-litningi • Allir einstaklingar sem hafa Fanconi anemia vegna galla í þessum þætti ættu að vera karlkyns • Frumur frá þessum einstaklingum ættu að hafa skerðingu í monoubiquitineringu á FANCD2 • Einstaklingar sem uppfylltu þessi skilyrði voru athugaðir • 1 hópur sjúklinga með Fanconi anemia uppfyllti skilyrðin, gerð FA-B

11. Í frumum úr einstaklingum úr hópi FA-B fannst ekki FAAP95 • Genið sem tjáir FAAP95 var með fasabreytingu sem veldur stop tákna í þremum einstaklingum, og einn var með úrfellingu í geninu

12. Þegar frumur úr þessum einstaklingum voru ummyndaðar með FAAP95 cDNA hvarf ofurnæmni fyrir Mitomycin C • Og monoubiquitinering af FANDC2 varð eðlileg • Sannaði að FAAP95 tengist FA-B • Genið var nefnt FANCB • BRCA2 var ekki orsökin, eins og áður var haldið • allavega ekki eitt og sér, þó einn einstaklingur með gerð FA-B hafi greinst með gallað BRCA2 (arfhreint)

13. X-tengdar erfðir • X-tengdar erfðir voru ekki áður þekktar í Fanconi anemia • Móðir tveggja einstaklinga og systir eins reyndust vera arfblendnir berar fyrir stökkbreytingu á FANCB

14. Í konum er annar X-litninginn metýleraður • Metýleraður litningur er óvirkur, allel þar eru ekki tjáð • gerist snemma á fósturskeiði • í 50% frumna ætti því X frá föður að vera metýlerað, í hinum ætti X frá móður að vera metýlerað

15. Þetta var athugað í mæðrum sem voru berar • Litnið klippt með skerðiensími HhaI sem klippir ekki metýlerað litni • Það litni sem var ekki klippt var magnað upp með PCR • Bara stökkbreytta allelið magnaðist upp = Stökkbreytta allelið var alltaf á metýleraða litningingnum Eðlilega allelið er á litningnum sem er virkur

16. X litningur með mutant FANCB er óvirkjaður • Polymorphic gen AR • Athugað hvort AR er tengt WT eða M FANCB • Klippt með HhaI • AR allelið tengt M var metýlerað • Sýnir að litningurinn með M er óvirkjaður

17. Orsökin fyrir háu hlutfalli WT í arfberum er líklega að frumur sem tjái stökkbreytt FANCB vaxa illa og fara gjarnan í stýrðan frumudauða • Í þroskun hafa þessar frumur dáið, sterkt val fyrir hinum. • Eitthvað af frumum með stökkbreytt FANCB gæti þó verið til í þessum arfblendnu einstaklingum • Þessar frumur eru með aukna krabbameinshættu • Þarf að fylgjast með arfberum m.t.t. þessa • Skiptir máli við erfðafræðilega ráðgjöf • berar eiga 50% möguleika á að eignast son sem er veikur eða dóttur sem er arfberi

18. Vegna þess að bara er eitt virkt eintak til í hverri frumu er fruman í meiri hættu af völdum stökkbreytinga • Ekki er til annað allel til að mynda eðlilega afurð ef genið stökkbreytist • Þessar frumur fá Fanconi anemia einkenni • Veldur aukinni hættu á krabbameini