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HEMOFILIA

HEMOFILIA. ENFERMEDAD DE VON WILLEBRAND. PREVALENCIA. Hemofilia A 1/5000 - Hemofilia B 1/25000 - VWD 3% poblaci ón. protómero dominios funcionales ligandos. Factor von Willebrand. Propéptido Subunidad Madura. I S. 1 2050.

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Presentation Transcript

  1. HEMOFILIA ENFERMEDAD DEVON WILLEBRAND

  2. PREVALENCIA • Hemofilia A 1/5000- Hemofilia B 1/25000 - VWD 3% población

  3. protómero dominios funcionales ligandos Factor von Willebrand PropéptidoSubunidad Madura I S 1 2050 D1 D2 D’ D3 A1A2A3 D4BC1C2 S I S D’ D3 A1A2A3 D4BC1C2 S I RGD Colágeno GPIIb-IIIa FVIII GPIb Heparina Heparina Colágeno Sulfátidos

  4. RETICULO ENDOPLASMICO GOLGI vWFEnsamble Multímeros Furina Sadler JE, 2005

  5. Proteolisis aumentada (vWD2A) ADAMTS-13 kproteolisis Plasma Inicial vWFEnsamble y Catabolismo ksecreción kdepuración Depuración aumentada (vWD1 Vicenza) Sadler JE, 2005

  6. FACTOR VIII NH 2 A1 A2 B A3 C1 C2 Secreción Preactivación Activación Inactivación 200kD 80kD IIa 1648 90kD HRG 80kD IIa 740 IIa 50kD 43kD 73kD 372 APC IIa Xa Xa 1689 45kD 67kD 336 1721 Lollar P & Parker CG, 1989

  7. FVIII-VWF A1 A2 FVIIIa C2 C1 A3 IIa, FXa 372 A2 FVIII 740 A1 C1 A3 B VWF C2 1689 N N C C S-S S-S Vlot et al., 1998

  8. FVIII/VWF - Propiedades FVIII VWF Clínica Hemofilia vWD Producción S. Hepáticos C. Endoteliales Megacariocitos Gen Cromosoma X Cromosoma 12 Molécula Heterodímero Multímero Función Coagulación Procofactor Adhesión Endotelio/Sub Transporta FVIII

  9. FVIII/VWF - Nomenclatura ISTH

  10. HEMOFILIA A Recesiva Ligada al sexo (gen FVIIICr X) PORTADORA HEMOFILICO

  11. HEMOFILIA Modo de Herencia

  12. HEMOFILIA Modo de Herencia

  13. HEMOFILIADiagnóstico “sencillo” - APTT prolongado- FVIII disminuido

  14. HEMOFILIA - Clasificación Severa < 1% VIII Moderada 1-5% VIII Leve >5% VIII

  15. HEMOFILIADiagnóstico de Portadoras

  16. PORTADORA OBLIGADA • Padre hemofílico • Hijo hemofílico y antecedentes (vía materna) • 2 o más hijos, sin antecedentes familiares No requiere estudio

  17. PORTADORA POTENCIAL • Hijo hemofílico, sin antecedentes familiares • Sin hijos y con antecedentes (vía materna) Dificultad diagnóstica

  18. PORTADORASLyonización Ovulo Fertilizado Heterocigota Clones XMXP XP XM XM XP XP XM XP XM XM XP XM XP

  19. PORTADORAS HEMOFILIA Factor VIII Portadoras Normales probabilidad 50 100 FVIII

  20. Bioensayos DESVENTAJAS • Probabilidad • Error por lyonización extrema

  21. Análisis de ADN VENTAJAS • Certeza • Independiente de lyonización

  22. Análisis de ADN Complejo • Alteración heterogénea • Afecta diferentesregiones del gen • No aplicable a todos los casos

  23. -/+ - ? - -/- IDENTIFICACION INDIRECTA No Certeza Análisis de segregación de RFLP PORTADORA (-) asociado al defecto

  24. IDENTIFIACION DIRECTA Inversión del intrón 22 ↓ 50% hemofílicos severos Certeza

  25. IDENTIFIACION DIRECTA • Inversiones • Deleciones • Inserciones • Mutaciones “sin sentido” • Mutaciones “sentido falso”

  26. HEMOFILIA B Recesiva Ligada al sexo (gen FIXCr X) PORTADORA HEMOFILICO

  27. HEMOFILIA - Clasificación Severa < 1% IX Moderada 1-5% IX Leve >5% IX

  28. HEMOFILIA BDiagnóstico “sencillo” - APTT prolongado- FIX disminuido

  29. protómero dominios funcionales ligandos Factor von Willebrand PropéptidoSubunidad Madura I S 1 2050 D1 D2 D’ D3 A1A2A3 D4BC1C2 S I S D’ D3 A1A2A3 D4BC1C2 S I RGD Colágeno GPIIb-IIIa FVIII GPIb Heparina Heparina Colágeno Sulfátidos

  30. VWDClasificación RevisadaSadler E, 1994 Tipo 1Deficiencia cuantitativa parcial Tipo 2Alteración cualitativa Tipo 3“Ausencia”de VWF

  31. VWDGenética VWF Cromosoma 12 (12p1212pter)

  32. VWD – TIPOSFrecuencia (%) Castaman G, 2003

  33. VWD Serie 1885 Pacientes (Tipo I 91% ) • FVIII 61,6% • VWF:Ag 62,2% • TS 58,4% Woods AI, 2001

  34. Modificadires Ambientales edad, género, trauma Enfermedad primariamutación Chance Niveles Variables VWF ? Genes modificadores Difícil Diagnóstico VWFExpresión VariablePenetrancia Incompleta Ginsburg D, 2001

  35. VWF-Variabilidad • Individual • Familiar

  36. VWF-Variabilidad • Factores • 40% no genéticos • 60% genéticos

  37. VWF-Variabilidad • Factores no-genéticos • Edad • Estrés • Ejercicio • H. Tiroideas • Estrógenos • F.Aguda

  38. VWF-Variabilidad • Factores genéticos • Grupo ABO  20-30% variabilidad Grupo “O” VWF Hipótesis Glicosilación Alteración • procesamiento • estabilidad • secreción

  39. VWD Distribución según grupo ABO • “AB” 0,6%  difícil diagnóstico • “O” 70%  más sintomático > frecuencia de consulta Woods AI, 2001

  40. VWFPruebas Específicas Cuantitativa Cualitativa VWF:Ag SI NO VWF:RCo SI SI VWF:CB SI SI Multímeros SEMI SI

  41. VWF-ELISA 1 2 3 4 a-vWF vWF a-vWF-HRP Color-Abs 2. Incubación con muestra o control 1. Anti-VWF inmovilizado 3. Incubación con anti-VWF-conjugado 4. Incubación con sustrato cromogénico

  42. VWF:RCo Plaquetas normales Plasma del paciente

  43. VWF:RCo Plaquetas normales Plasma del paciente Ristocetina Agregometría Agregación c/Ristocetina

  44. VWF:RCo Plaquetas normales Plasma del paciente Ristocetina Agregometría Agregación c/Ristocetina PRP Plaquetas del paciente Plasma del paciente

  45. VWF:RCo Plaquetas normales Plasma del paciente Ristocetina Agregometría Agregación c/Ristocetina PRP Plaquetas del paciente Plasma del paciente Ristocetina Agregometría

  46. Normal Agregación c/Ristocetina vWD-Tipo 1 vWD-Tipo 2A vWD-Tipo 3 Kasper C, 2005

  47. VWF:CB Unión Colágeno 1 2 Colágeno Tipo III BSA a-vWFconejo 3 4 Muestra Esferas poliestireno IgG F(ab’)2* 1. Inmovilización 5 6 2. Bloqueo 3. Colágeno  VWF Citometría de flujo 4. VWF  a-VWF 5. a-VWF  IgGF(ab’)2fluoresceína 6. Adquisición

  48. Actividad VWF-ELISA 1 2 3 4 a-vWF vWF a-vWF-HRP Color-Abs 1. AcMo a-vWFepitope funcional inmovilizado 2. Incubación con muestra o control 3. Incubación con anti-vWF-conjugado 4. Incubación con sustrato cromogénico

  49. Agregación c/Ristocetina Kasper C, 2005

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