1 / 65

Přehled analytických metod II.

Přehled analytických metod II. Metody. atomová spektrometrie (AAS, AES, kvantometry) molekulová spektrometrie (UV/VIS, IČ, NMR) chromatografie (GC, HPLC, TLC, CE) hmotnostní spektrometrie spojené techniky. Schéma spektrometrů. emise. absorpce. fluorescence, rozptyl světla.

totie
Download Presentation

Přehled analytických metod II.

An Image/Link below is provided (as is) to download presentation Download Policy: Content on the Website is provided to you AS IS for your information and personal use and may not be sold / licensed / shared on other websites without getting consent from its author. Content is provided to you AS IS for your information and personal use only. Download presentation by click this link. While downloading, if for some reason you are not able to download a presentation, the publisher may have deleted the file from their server. During download, if you can't get a presentation, the file might be deleted by the publisher.

E N D

Presentation Transcript


  1. Přehled analytických metod II.

  2. Metody • atomová spektrometrie (AAS, AES, kvantometry) • molekulová spektrometrie (UV/VIS, IČ, NMR) • chromatografie (GC, HPLC, TLC, CE) • hmotnostní spektrometrie • spojené techniky

  3. Schéma spektrometrů emise absorpce fluorescence, rozptyl světla

  4. Plamenová fotometrie plamen – monochromátor – fotoelektrický násobič – zpracování signálu • plamen – odpaření roztoku, atomizace a excitace atomů • (zářivou) deexcitací dochází k záření, jehož frekvence (vlnová délka) odpovídá rozdílu dvou energetických hladin elektronů • záření prochází monochromátorem a dopadá na fotonásobič • intenzita záření je závislá na množství analytu

  5. Plamenová fotometrie • princip plamenové emisní spektroskopie s použitím plamene o nízké teplotě (propan, butan, jejich směsi nebo zemní plyn) • vlnové délky – Na+ - 589 nm, K+ - 767 nm, Ca2+ - 423 nm.. • kvantitativní analýza alkalických kovů a kovů alkalických zemin • vhodné pro stanovení v potravinách, nápojích, hnojivech, půdě, při těžbě kovů, v chemickém, farmaceutickém, papírenském a olejářském průmyslu

  6. Atomová emisní spektrometrie • atomizace a excitace atomů – zářivá deexcitace • působení vysokých energií • čím složitější elektronový obal atomu, tím složitější spektrum (větší počet čar ve spektru) • čáry neionizovaných atomů, iontů • budící zdroj – záření (lasery), elektrická energie (oblouky, jiskry, výboje, plazmatron), chemické energie (plameny) • disperzní systém (mřížka, hranol) • detekce – fotonásobič (historie – fotografická deska) • kvantometry – rychlá multielementární analýza

  7. FN plamen štěrbina výbojka s dutou katodou mřížkový monochromátor zavádění aerosolu vzorku dutá katoda – materiál ze stanovovaného kovu anoda – těžko tavitelný materiál (Zr, W..) Atomová absorpční spektrometrie

  8. Atomová absorpční spektrometrie Monochromátor Fotonásobič mřížka dutá zrcadla uspořádání Czerny-Turner

  9. Co s kolísáním signálu a neatomovou absorpcí ? VDK-výbojka s dutou katodou, DV-deuteriová výbojka, PZ-polopropustná zrcadla, DZ-dutá zrcadla, MOD-modulátor (rotující clona), PL-plamen (nebo grafitová kyveta), VZ-aerosol vzorku, MON-mřížkový monochromátor, FN-fotoelektrický násobič

  10. AAS - shrnutí • atomizace (zmlženého) vzorku v plameni • emise záření s charakteristickými spektrálními čárami pro stanovovaný prvek – z duté katody • absorpce tohoto záření atomy analytu v plameni (nebo kyvetě) • zbytek záření (neabsorbované) prochází na fotonásobič • fotonásobič převede fotony na elektrony, zesílí signál a zaznamená proud

  11. Molekulová spektrometrie • Ultrafialová a viditelná oblast (200 – 380 – 800 nm) • absorpcí záření určité vlnové délky dochází k excitaci valenčních elektronů • zdroj – deuteriová výbojka (UV), wolframová žárovka • disperzní systém (hranol, mřížka, filtr) • kyveta (křemenná – UV, skleněná, plastová), průtočná • detekce – fotonásobič • jednopaprskové • dvoupaprskové • diodové pole

  12. Kalibrační graf - fenol 0.8 0.6 absorbance 0.4 y = 0.1542x - 0.0236 0.2 2 R = 0.9979 0 0 2 4 6 koncentrace (mg/l) Využití UV/VIS spektrometrie • kvalitativní analýza – poloha a intenzita pásů ve spektru (charakteristické pro chromoforní skupiny v molekule), atlasy spekter, malé rozdíly – často doplňkové informace k dalším metodám) • kvantitativní stanovení látek (kalibrace)

  13. Infračervená spektrometrie (IČ, IR) • absorpce záření v oblasti (10 – 500 – 4000 – 10000) • absorpce je spojená se změnou vibračních a rotačních stavů molekuly • !! základní podmínka interakce IČ záření – musí docházet ke změně dipólového momentu během vibrace – HCl absorbuje, N2 neabsorbuje, CO2 ? • kvalitativní analýza – poloha a intenzita pásů ve spektru • ve spektru – valenční vibrace – vzdálenost jader - deformační vibrace – valenční úhly

  14. IČ instrumentace • zdroj záření – tuhé zářiče z polovodičových materiálů (globar – SiC, Nernstova tyčinka oxidy zirkonia a yttria) • disperzní systém (několik mřížek, interferometr FT-IR) • kyvety – pro kapaliny a plyny (materiál KBr, NaCl) • pevné vzorky – tablety s KBr, nujolová suspenze (nasyc uhlovodíky –C20- C30), reflexní spektra • detekce - termoelektrický článek • zpracování signálu (odečet absorbance, v případě FT – matem. transformace, porovnání s databází)

  15. C-halogen, mimorovinné deformační C-H valenční vibrace Y-H, násobné vazby oblast otisku prstu (C-C, C-N, C-O) IČ spektrum

  16. Příklady IČ vibrací

  17. IČ spektrum

  18. Nukleární magnetická rezonance (NMR) • měřená látka je umístěna v silném magnetickém poli • musí být přítomna jádra s nenulovým jaderným magnetickým momentem se • absorpcí radiofrekvenčního záření dojde ke změně orientace magnetického momentu jádra – do vyšších energetických stavů (E1 E2) precesní pohyb Larmorova frekvence g-gyromag. poměr jádra do základní stavu přechází relaxačními procesy

  19. NMR - instrumentace • magnet (supravodivý) – a - póly, b - přídavné cívky pro změnu B • vysokofrekvenční vysílač (elektromagnetické pole je orientováno kolmo na osu vnějšího pole magnetického) - c • sonda – kyveta se vzorkem - e • přijímač – indukční cívka - e • zpracování signálu (pulsní techniky – Fourierova transformace) e, f, g – registrační část k – kontrolní oscilokop

  20. NMR – chemický posun • elektrony v okolí jádra ovlivňují velikost magnetické indukce v místě jádra  chemický posun d vM – frekvence měřeného pásu vST – rezonanční frekvence standardu (TMS)

  21. A – důvod rozštěpení methylového píku - sousední methylenové protony B – důvod rozštěpení methylenového píku - sousední methylenové protony ¯­­ ­¯­ ­­¯ ¯¯­ ¯­¯ ­¯¯ ¯­ ­¯ ­­­ 1:3:3:1 ¯¯¯ ­­ 1:2:1 ¯¯ Spin – spinová interakce a integrální intenzita signálu integrální intenzita signálu: odpovídá počtu protonů

  22. NMR - aplikace • 1H-NMR, 13C-NMR, 19F-NMR • strukturní analýza – spolu s MS nejsilnější nástroj vůbec !!! • kvantitativní analýza • studium rotace skupin v molekule, vodíkových vazeb

  23. Separační techniky • klasické techniky – destilace, extrakce, filtrace, centrifugace .. Chromatografie • dělení podle mobilní fáze plyn – plynová chromatografie (GC) kapalina – kapalinová chromatografie (HPLC, TLC) Elektromigrační techniky • kapilární elektroforéza, isoelektrické fokusace ...

  24. Chromatografie

  25. Plynová chromatografie 1-tlaková láhev (nebo generátor plynu), 2-regulace tlaku, 3-regulace průtoku, 4-dávkovací zařízení, 5-detektor, 6-termostat, 7-kolona, 8-zesilovač, 9,10-počítač

  26. kolona nosný plyn odpad Plynová chromatografie • nosný plyn – N2, H2, He, Ar • dávkování vzorku – vyhřívaná nástřiková hlava plynové vzorky (10-1000 ml) kapalné vzorky (1-100 ml) pevné vzorky (příprava roztoků) split/splitless:

  27. Plynová chromatografie • kolony dnes prakticky výhradně kapilární kolony (průměr 0,1 – 0,5 mm, délka 10 – 100 m) • sorbenty – silikagel, aktivní uhlí, molekulová síta, porézní polymery • kapalné stacionární fáze – Carbowax (polyethylenglykol), polysiloxany, polyestery

  28. Plynová chromatografie • detektory - tepelně vodivostní detektor plamenový ionizační detektor nedestruktivní, méně citlivý, univerzální destruktivní, citlivý selektivní - uhlovodíky

  29. Plynová chromatografie • detektory - detektor elektronového záchytu nedestruktivní, citlivý, selektivní – halogenderiváty, nitrolátky - hmotnostní spektrometr – vysoce specifický, destruktivní, velmi citlivý

  30. Plynová chromatografie • analýza těkavých látek • netěkavé látky – derivatizace, pyrolýza • vysoká účinnost • identifikace - retenční data • kvantifikace – plocha (výška) píku • výhodná kombinace s MS GC analýza PCB 1. 2-chlorbifenyl, 2. 4-chlorbifenyl, 3. 2,2'-dichlorbifenyl, 4. 2,4-dichlorbifenyl, 5. 4,4'-dichlorbifenyl, 6. 3,5,3'-trichlorbifenyl,7. 2,4,4'-trichlobifenyl, 8. 2,5,2',5'-tetrachlorbifenyl,9. 2,4,6,4'-tetrachlorbifenyl, 10. 3,4,4'-trichlorbifenyl,11. 2,3,4,6,2'-pentachlorbifenyl, 12. 2,3,4,4'-tetrachlorbifenyl,13. 2,3,4,5,2'-pentachlorbifenyl, 14. 2,4,5,2',4',5'-hexachlorbifenyl,15. 2,3,4,2',4',5'- hexachlorbifenyl, 16. 2,3,4,5,2',3'-hexachlorbifenyl

  31. Kapalinová chromatografie 1,2 – zásobníky mobilní fáze 3 – programování gradientu 4 – směšovač 5 – odplyňovač 6 – vysokotlaké čerpadlo 7 – tlumič tlakových pulsů 8 – trojcestný ventil 9 – saturační předkolona 10 – dávkovací zařízení 11 – kolona 12 – detektor 13 – jímač frakcí 14 – zesilovač 15, 16 – vyhodnocování - počítač

  32. Vysokotlaká čerpadla velkoobjemová stříkačka • Elektromotor s krokovým motorem • Převodovka • Závit na táhle pístu • Píst • Válec naplněný MF • Ke koloně • Ventil umožňující plnění čerpadla MF • Zásobník MF pístová čerpadla – malý objem činné části • Elektromotor • Převodový mechanismus • Píst • Pracovní prostor válce • Výtlačný ventil • Nasávací ventil • Ke koloně • Zásobník mobilní fáze • Těsnění pístu

  33. Dávkovací ventily Schéma dávkování a) smyčka b) vnitřní dutina

  34. A – pórovitý silikagel (>25mm) B – povrch film stac. fáze C –povrchová pórovitost D – mikropartikulární náplně (3 - 20mm) Kolony • Ovlivňování účinnosti • homogenní a rovnoměrné plnění kolony sorbentem • použití náplní s tenkou aktivní vrstvou na povrchu • zmenšování částeček sorbentu • monolity • Typy stacionární fáze • chemická modifikace silikagelu - sorbenty C-18, C-8 (reverzní fáze), C-2 • polymerní sorbenty (inertnost, menší mechanická stabilita) • iontoměniče • afinitní chromatografie

  35. Detektory • Typy detektorů • Spektrofotometrický (UV-VIS) – absorpce záření • Refraktometrický - index lomu • Fluorescenční - fluorescence • Elektrochemický - potenciál, proud • Vodivostní - vodivost • Light scattering - rozptyl světla • Spojení s MS (MSn), IČ, NMR

  36. 1–zdroj UV záření, 2-měrná cela, 3-referentní cela, 4 – fotočlánky, 5-optický systém detektoru, 6-přítok a odtok MF z kolony, 7-čistá MF Spektrofotometrický detektor

  37. Detektor diodového pole

  38. Fluorescenční detektor Schéma fluorimetrického detektoru • nutnost derivatizovat (nebo fluoreskující látky) • vyšší cena detektoru • vysoká citlivost 1-excitační zář.; 2-emisní fluorescenční zář.; 3-křemenná cela; 4-štěrbina; 5-maska s počerněným povrchem; 6-konkávní zrcadla 7-fotonásobič

  39. Vodivostní detektor Principem je měření vodivosti během HPLC analýzy. Průchod vodivých analytů způsobí změnu vodivosti. • malý objem detekční cely (dvouelektrodové uspořádání) • často v bezkontaktním provedení • nejvíce využíván tam kde se analyzují ionty: • iontoměničová chromatografie • ion párová chromatografie • kapilární elektroforéza

  40. Spojení s hmotnostní spektrometrií • Proč spojení HPLC/MS – co obě metody nabízí ? • HPLC je základní technika pro separaci netěkavých látek (od malých molekul léčiv až po proteiny) • hmotnostní spektrometr poskytuje informace pro identifikaci (molekulová hmotnost, struktura) při zachování ostatních vlastností detektoru (kvantifikace, sledování čistoty vzorku) • umožňuje analyzovat látky bez chromoforu • další rozměr selektivity separace (SIM, MS-MS pro izobarické látky)

  41. tB 1.9 tA 1.4 signál 0.9 Dt=tB- tA 0.4 wB wA -0.1 0 5 10 15 20 čas Chromatogram Základní parametr chromatografie - Rozlišení • Analyticky významné parametry • identifikace – retenční časy • kvantifikace – plocha pod píkem • – výška píku

  42. vi Ff Fe + - + Kapilární elektroforéza Fe ………….. elektrická síla Ff ………….. odporová síla Fe=zi.e.E Ff=k.h.vi pro kulové ionty k=6.p.ri Pro rovnost obou sil: zi.e.E = 6.p.h. ri .vi

  43. Kapilární elektroforéza

  44. EOF det Stěna kapiláry s disociovanými skupinami inj A1 + N - A2 K2 K1 difuzní vrstva Sternova vrstva (pevná) -SiOH Û –SiO- + H+ (pKa ~ 6) Elektroosmotický tok

  45. 365 um 75 um Detekce • používají se kapiláry o velmi malém průměru(snadná disipace Jouleova ohřevu, kapilární síly převládají nad gravitací)

  46. Detekce • UV/VIS – adaptované cely z kapalinové chromatografie • LIF – laserem indukovaná fluorescence • spojení s ESI-MS

  47. Využití kapilární elektroforézy • vysoká účinnost • pružnost při optimalizaci selektivity • tolerance ke složitým matricím • rychlost (high throughput) • klinické a biochemické aplikace • farmacie ( problémy s QC) • životní prostředí • průmysl

  48. Hmotnostní spektrometrie • ovlivňování pohybu iontů ve vakuu působením elektrického a magnetického pole • určení poměru hmotnosti ku náboji • měření intenzity iontů • hmotnostní spektrum • určení molekulové hmotnosti • přítomnost a poměr izotopů • přesné měření m/z – elementární složení iontu • fragmentace iontů – informace o struktuře látky • nejúčinnější identifikační nástroj v analytické chemii

  49. m/z=94 Dm/z=28 Hmotnostní spektrometrie

  50. Hmotnostní spektrometrie fragmenty molekulární pík izotop chloru

More Related