120 likes | 267 Views
MTA-MFA Nyári Iskola 2011. június 27 - július 1. Budapest. Mérések ellipszométerrel - Fehérjerétegek vizsgálata. Készítette: Kozák Olívia Krisztina Tanár: Dvorák Cecília Témavezetők: Németh Andrea és Fodor Bálint. Áttekintés. Bioszenzorikai fejlesztés (pl. vércukorszintmérő)
E N D
MTA-MFANyáriIskola 2011. június 27 - július 1. Budapest Mérések ellipszométerrel - Fehérjerétegek vizsgálata Készítette: Kozák Olívia Krisztina Tanár: Dvorák Cecília Témavezetők: Németh Andrea és Fodor Bálint
Áttekintés • Bioszenzorikai fejlesztés (pl. vércukorszintmérő) • Mérési előkészületek a biolaborban • Ellipszométer működésének megértése és használatának elsajátítása • Mérés során fehérjerétegek leválasztása • Fehérjeréteg optikai minősítése és jellemzése az ellipszometriai kiértékelés alapján
Mi az a bioszenzor? • bioszenzor = felismerő elem + jelátvivő egység • Felismerő elemek felületi adszorpciója • Célmolekulák szelektív, nagy érzékenységű megkötése J. P. Chambers et al. Curr. Issues Mol. Biol. 10: 1–12 (2008).
Fehérjék FLAGELLÁRIS FILAMENTUM • Bakteriális flagellum sejten kívüli része (~ 5-10 µm) • Több tízezer flagellin monomer • Specifikus ligandum (As, Ni) megkötésére alkalmazható FIBRINOGÉN • Plazmafehérje • Véralvadásban van szerepe • Májban és a csontvelőben képződik
Spektroszkópiai Ellipszometria (SE) • Optikai felületvizsgálati módszer • Reflexió során bekövetkező polarizációváltozás mérése • SE spektrum: Psi(λ) és Delta(λ) Indirekt eljárás => optikai modellek megalkotása
Érintés- és roncsolásmentes • Időbeli változások nyomon követése a hordozó felületén • Nanométeres érzékenység, nagy pontosság • Mindezt 1 másodperc alatt! Mérés +2 nm
Lépésről lépésre… • Minták előkészítése: • Szubsztrát tisztítása (H2O2:H2SO4=1:3) • PBS (pufferoldat) készítése • Fehérjeoldat (c ~ 0,2 mg/ml) • Mérés: • Spektrum felvétele • Hordozó: Si + SiO2 • + Folyadékcella (ablak korrekció) • + Puffer • Folyamat közben (in situ) mérés • Alapvonal (puffer) • Fehérje adszorpció • Pufferes mosás • Felülettérképezés
Mérési eredmények Optikai modell + de Feijter formula:
Térképezés Mérési pontok: Fibrinogén leszárított mintán: [nm] Gumigyűrű helye Flagelláris filamentum leszárított mintán: Si hordozó + termikus oxid: [nm] [Delta]
Összefoglalás • Alapkutatás • Orvosi alkalmazások • Kutatás menetének megismerése • Középiskolai ismeretek (optika, hullámtan, fehérjék…) egészen új, és gyakorlati oldalú megközelítése, bővítése • Új mérési eljárás elsajátítása • Gyakorlatok egy laborban • Megismerkedés új emberekkel
Köszönöm a figyelmet! Köszönetnyílvánítás: • Hálás vagyok a lehetőségért és köszönöm szépen mindazoknak, akik segítettek, támogattak! • Szüleimnek • Fizikatanáromnak, Dvorák Ceciliának • A szervezőnek, pártfogónknak, Daróczi Csabának • Témavezetőmnek, Németh Andreának és Fodor Bálintnak • A Fotonika Osztály munkatársainak; Fried Miklós, Patkós Dániel, Kurunczi Sándor, Horváth Róbert, Petrik Péter, Lohner Tivadar