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Linfocitos

Linfocitos. Fagocitos. Sistema inmune. Algunas células capturan microorganismos y otros antígenos que presentan a los linfocitos. Definición de Enfermedad celíaca. 1.Enteropatía por sensibilidad al gluten. 2.Trastorno inflamatorio multiorgánico:

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Linfocitos

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Presentation Transcript

  1. Linfocitos Fagocitos Sistema inmune Algunas células capturan microorganismos y otros antígenos que presentan a los linfocitos

  2. Definición de Enfermedad celíaca 1.Enteropatía por sensibilidad al gluten 2.Trastorno inflamatorio multiorgánico: mediado por el sistema inmune y desencadenado por la ingestión degluten (y otras prolaminas) en individuos genéticamente predispuestos, aparición a cualquier edad, distribución mundial, caracterizado por la presencia de autoanticuerpos, con o sin manifestaciones clínicas o enteropatía. Basado en Troncone et al, CDEUSSA 2008

  3. Prioridades en la Enfermedad celíaca * Revisar los criterios diagnósticos Integrar marcadores serológicos, genéticos, histológicos * Mejorar protocolos de uso de la serología (Sería necesario identificar marcadores de uso diagnóstico que no se relacionen con la ingestión de gluten) * Promover conocimiento de la enfermedad, mejorar detección y tratamiento precoz * Aumentar la adherencia a dieta sin gluten * Identificar los mecanismos patogénicos * Desarrollar terapias complementarias Basado en R. Troncone JPGN 2004

  4. Factores implicados en la inmuno- patogenia de la enfermedad celíaca Extrínsecos Gluten/trigo prolaminas Intrínsecos Infecciones, Lactancia, flora? Hipersensibilidad tipo IV Linfocitos T CD4+ Autoanticuerpos Citotoxicidad Genéticos HLA-DQ2/DQ8 Genes no-HLA Inmunológicos Pérdida de tolerancia oral? EA2009

  5. LGQQQPFP------------PQ------------QP------YPQPQPF L – QLQPFPQPELPYPQPELPYPQPELPYPQPQPF 19mer 33mer a-gliadina Riqueza en Glutamina y Prolina

  6. cis trans HLA-DQ(a1*05,b1*02) HLA-DQ(a1*03,b1*0302) a a cis b b a b DR5 DR3 DR4 0302 0301 0301 05 02 05 DR7 02 0201 DQB1 DQA1 DQB1 DQA1 DQB1 DQA1 DQ2 DQ8 Susceptibilidad genética asociada a HLA Máximo riesgo en homozigotos DR3-DQ2 o combinación DR2-DQ2 con DR7-DQ2 Sollid LM. et al. J Exp Med 1989

  7. Célula presentadora de antígeno CD4 DQ2 Linfocito T

  8. b a DR3 02 05 La molécula HLA-DQ2 presenta péptidos de gliadinas a los linfocitos T CD4+ Transglutaminasa modifica la gliadina CD4 TCR gliadina Linfocito T HLA-DQ2 (ab) DQB1 DQA1 Efecto dosis del dímero DQ2.5 Número/calidad de moléculas DQ2 mejoran la presentación de péptidos

  9. CD4 TCR DQ2 TCR ab 7 1 Q 4 9 Q P P 6 S P Q P Q R Q F Q E - H - TGt induce deamidación - H H Control genético de la Inmunidad específica al gluten HLA-DQ2 HLA-DQ2 PQQPQQSFPQQQRP EA2009

  10. Frecuencia de HLA-DQ2 y otros alelos en la población de Castilla y León 25% DQ2+ DQ2 negativos: 6% en España 14% Finlandia Alrededor del 10% de familiares DQ2+ desarrollan la EC Arranz E. J Clin Immunogenet 1997; Polvi A-Arranz E. Hum Immunol 1998

  11. HLA-DQ(a1*05,b1*02) HLA-DQ(a1*03,b1*0302) Susceptibilidad genética: sistema HLA contribuye <40% (Otros genes: relacionados con la función inmunológica) Población general Individuos con E. celíaca Expresión HLA-DQ2/8 Solo el 2% de portadores HLA-DQ2+ desarrollan EC Basado en Kagnoff MF. J Clin Invest 2007

  12. Genes HLA y no-HLA en enfermedad celíaca Otros en región HLA: genes MICA, MICB, TNF (desequilibrio ligamiento)

  13. IL-15 Th1 Anticuerpos B Enfermedad celíaca: modelo en 2 señales Péptido 19-mer Péptido de gliadina 33-mer IL-15Ra HLA-clase I 1 CD8 CD71 MICA KGF MMP NKG2D TGt IFNg 2 TCRab CD4 DQ2 NLM EA2009

  14. Datos conocidos en la patogenia 1. Digestión incompleta del gluten con acúmulo de fragmentos ricos en glutamina y prolina 2. Efecto doble del gluten sobre el intestino interviene la Inmunidad Innata en epitelio (citolisis), y la I. Adaptativa en la lámina propia (linfocitos T CD4+) 3. La transglutaminasa modifica el gluten deamidación de péptidos, aumento de inmunogenicidad 4. La molécula HLA-DQ une ciertos péptidos restricción en la presentación de péptidos a linfocitos T 5. Producción de citocinasproinflamatorias Balance alterado. Pérdida de tolerancia. Remodelación EA2009

  15. Tipo 0 Tipo 1 Tipo 3 Tipo 4 Tipo 2 a Espectro de cambios histológicos asociados al gluten (reversibles) b Marsh MN (1993) Gastroenterology

  16. Modelo de cultivo ex vivo de explante de biopsia Antígenos, péptidos Estudios histológicos Aislamiento celular Determinación de proteínas Medio de cultivo Aislamiento y purificación de poblaciones celulares EDTA DTT colagenasa Ficoll EA2006

  17. Niveles mRNA de IFNg y cociente IFNg/TGFb Respuesta Th1 con predominio de IFNg Biopsias sin cultivar Correlación con el grado de lesión León AJ et al. Clin Exp Immunol 2006;146:479-85

  18. a b IL-18 podría mantener las respuestas Th1 a.Niveles mRNA de IL-18. Biopsia sin cultivar b.Inmunohistoquimia en secciones (criptas) Densitometría: bandas de IL-18 (18 kDa) Análisis por Western blot: 1-6 EC activa, 7-8 controles, 9-10 patológicos León AJ et al. Clin Exp Immunol 2006;146:479-85

  19. b a b Expresión de IL-15 en biopsias de duodeno a. Niveles mRNA de IL-15 en biopsias sin cultivar (pacientes, controles) b. Inmunohistoquimia: células mononucleares en lámina propria Western blot: EC activa 1-4, control patológico 5-6, control normal 7-8 León AJ et al. Clin Exp Immunol 2006;146:479-85

  20. a Extracto biopsia Sobrenadante de cultivo (24h) b Gliadina induce IL-15 en cultivo de biopsia Bernardo D. et al. Gut 2007; Clin Exp Immunol 2008 Expresión mRNA de IL15Rα (Biopsia sin cultivo)

  21. 1 2 3 4 5 92 82 Zimograma: técnica electroforética, para revelar bandas que degradan el mismo sustrato. 35 • Enzimas post-prolina (bacterias) • Matrix Metallopeptidasa-9 • MMP9, M10.004, 92 kDa • Prolyl Oligopeptidase • POP, S09.001, 80,7 kDa • Dipeptidyl—peptidase II • DPP7, S28.002, 54,3 kDa • Proline-specific peptidyldipeptidase • Streptomyces, M9D.002 33 26 Biopsias: controles no-EC (1,2), EC activa (3,4), en DSG (5) Pacientes muestran 7 perfiles con actividad degradadora gliadina de origen bacteriano 24 20 Bernardo D et al. Gut 2009;58:887-7

  22. Posibles tratamientos complementarios • Estrategias de tipo cuantitativo: Paliativas, impiden la llegada del gluten al intestino a) Generación de cereales no inmunogénicos Selección de cultivos. Modificación genética de cereales b) Destrucción del gluten, o bloqueo de su entrada Enzimas proteolíticos. Ligandos (Acs). Bloqueo de zonulina 2.Estrategias de tipo cualitativo: Tratan la causa, modifican la respuesta al gluten a) Inhibición de la respuesta adaptativa: TGt, HLA-DQ2 b)Bloqueo de mediadores: antagonistas de CCR, a4b7, citocinas(IL15, IFNg, IL21,otras), TNFa (en EC refractaria) c) Inducción de tolerancia: falta por identificar epítopos dominantes y estrategias eficaces (Sobre células dendríticas) Falta un modelo animal: para estudiar eficacia, toxicidad/seguridad

  23. IL15 Th1 Anticuerpos B Posibles puntos de intervención terapéutica Anticuerpos anti-gluten Péptidos de gluten zonulina IL15Ra HLA-clase I CD8 MICA NKG2D tolerancia TGt IL21 IFNg TCRab CD4 DQ2 EA2008

  24. Inmunoterapia en la enfermedad celíaca Vacuna ¿realidad o ciencia ficción? -Podría elegirse entre la dieta sin gluten o la vacuna, aunque su eficacia sería de alrededor de 3 años -Sólo para pacientes DQ2/DQ8+ y Biopsia confirmada -Actúa sobre la respuesta inmune adaptativa -Criterios similares a la inmunoterapia utilizada en alergia y enfermedades autoinmunes -Problemas: es una inyección! ¿Cómo controlar la inmunidad innata al gluten? ¿Qué dosis utilizar y cuál es la vía óptima? ¿Qué péptido/epitopo T elegir ? (eficacia x3) Objetivo: re-inducción de la tolerancia al gluten 2c EA2006

  25. Epítopos estimuladores de los linfocitos T CD4+ Péptido origen HLA TG2 secuencia Glia (206-217) gliadina DQ8parcial SGQGSFQPSQQN Glt (723-735)gluteninaDQ8no QQGYYPTSPQQSG Glia-g1 (138-153) gliadina DQ2 si QPQQPQQSFPQQQRP Glia-a2 (62-75) gliadina DQ2 si PQPQLPYPQPQLPY Glia-a9 (57-68) gliadina DQ2 si QLQPFPQPQLPY Glia-a-20 (93-106) gliadina DQ2 si PFRPQQPYPQPQPQ Glt-156 (40-59)glutenina DQ2 si QPPFSQQQQSPFSQ Glt-17 (46-60)glutenina DQ2 si QPPFSQQQQSPFSQ Glia-g30 (222-236) gliadina DQ2 no VQGQGIIQPQQPAQL Glia-a9 (57-68) gliadina DQ2 si QLQPFPQPQLPY (Basado en Vader 2002, Koning 2003)

  26. a4b7 IL-10 Tr1 CCR9 Supresión de respuestas Th1 TGFb Th3 Anticuerpos Posible mecanismo de Tolerancia oral Antígenos solubles (dieta) y de la flora comensal Epitelio TSLP RA PGE2 TLR CPA TGFb CD80/86 CD28 CD4+ MHC TCR IL-10 16

  27. LIE LIE LIE MICA IL15 NKG2D Bloqueo de mediadores: estrategias combinadas Gliadina CCL20 IL15 IFNg IL21 Treg Th1 IFNa *IL15 e IL21 potencian respuestas CD4+ Th1. Activan a LIE CD8+ *IL21 estimula liberación MMP (fibroblastos) y producción CCL20 *IL21 inhibe maduración de CDs; y expresión de NKG2D por LIE

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