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C- 反应蛋白及临床应用

C- 反应蛋白及临床应用. 杨红玲. Protein Structure CRP 结构. C 反应蛋白的生理和生化. 在细胞因子 IL-6 家族诱导下， CRP 在肝中合 成迅速。 正常合成率为 l～10 mg／d， 急性炎症时每 天合成超过 lg/d。 在急性相反应高峰时肝大量合成蛋白，其中 20％是合成 CRP。 当 IL-6 刺激物缺乏时，在 2～4 h 内合成率降 至正常。 循环中 CRP 半衰期约19 h， 但一旦它与配体结 合，可快速的被清除。

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C- 反应蛋白及临床应用

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Presentation Transcript

  1. C-反应蛋白及临床应用 杨红玲

  2. Protein Structure CRP结构

  3. C反应蛋白的生理和生化 • 在细胞因子IL-6家族诱导下，CRP在肝中合 成迅速。 • 正常合成率为 l～10 mg／d，急性炎症时每 天合成超过 lg/d。 • 在急性相反应高峰时肝大量合成蛋白，其中 20％是合成CRP。 • 当IL-6刺激物缺乏时，在 2～4 h内合成率降 至正常。 • 循环中CRP半衰期约19h，但一旦它与配体结 合，可快速的被清除。 • 肝外合成对血清水平影响作用很小。

  4. CRP的生物学功能

  5. CRP的生物学功能-机理 • 结合坏死的内源性物质 在钙离子存在的情况下，CRP能结合坏死的内源性物质和效应细胞, 当正常的脂质双层结构被破坏致使内部磷脂暴露时，CRP可发生与宿主细胞的结合。 • 在系统性红斑狼疮的鼠模型中，注射CRP可改善SLE的状况。 • 人CRP基因的多态性导致的低基础水平表达增加了发生系统性狼疮的风险。 • CRP量的减少可能与SLE发病机理有关。 • CRP量的减少使结合的细胞碎片减少。

  6. CRP的生物学功能-机理 • 结合外源性物质 • 细菌、真菌、寄生虫中的细胞壁磷酸胆碱。 • CRP具有保护机体抗细菌感染的能力。 • CRP 保护机体抵抗致命性的细菌脂多糖和各种炎症介子的能力。

  7. CRP的生物学功能-机理 • 结合配体的CRP激活下列生物系统，导致配体的消除： • CRP对补体系统的激活. • CRP结合IgGFcR，增强自然杀伤细胞的活性。 • CRP的调理性质，调理即刺激细胞吞噬作用。 • CRP和血小板激活因子(PAF)结合　抑制PAF刺激的血小板聚集。

  8. CRP的生物学功能-机理 • CRP具有多效性的作用。 • 当抑制干扰素的合成时，CRP可诱导IL-1受体拮抗剂而增加抗炎细胞因子IL-10的释放 . • CRP也可诱导炎症反应。CRP向上-调节内皮细胞粘附分子的表达，刺激许多细胞释放IL-8，增加血浆纤维蛋白酶原催化剂抑制剂-1的表达和活性、增加IL-1, IL-6, IL-18, 和肿瘤坏死因子的释放. • CRP诱导或抑制炎症反应依赖于环境。

  9. CRP功能 • 识别和启动靶效应细胞及其产物并将其从组织中清除。 • 吞噬溶解入侵微生物。

  10. 急性相蛋白CRP合成的生物调控 • CRP基因位于1号染色体短臂，只有一个内含子，其分离编码信号肽的区域。 • 肝脏CRP合成的调节主要发生在转录阶段。由IL-6诱导，IL-1可增加此作用。 • CRP启动子最近区为STAT3 和Rel 蛋白的结合部位。 • 这些因子的相互作用增加DNA 结合C/EBP家属成员的稳定性，从而有效地诱导了CRP基因的表达。 • 神经元细胞、动脉硬化斑块、单核细胞和淋巴细胞也可以合成CRP。在这些部位的调节机制还不清楚。

  11. 修饰的CRP(m-CRP) -"Modified" CRP • 目前认为m-CRP是原CRP的单体。 • 与天然CRP不同,表现在分子大小,溶解度,抗原性,带电荷数等方面的差别. • m-CRP具抗菌作用。 • m-CRP具有强大地诱发炎症的作用。

  12. 检测方法 方　法　　　　　　灵敏度　　　　　参考献 试管内沉淀试验　　- 　　　　　JExpMed1930;52∶561 毛细管内沉淀试验　　10～20mg/L　　　AmJMed1950;8∶445 改良平板双扩散法　　10～20mg/L　　　IntArchAllergy1962 改良琼脂柱扩散法　　3.0mg/L　　　　　ProcSocExpBiol1955 改良单扩散法　　　　1.0mg/L　　　　 ActaPatholMicrobiolScand 琼脂糖凝胶电泳法　　1.0mg/L　　　　　ClinChimActa1969 放射电免疫扩散法　　10μg/L　　　　　JClinLabInvest1973 补体结合试验　　　　0.6mg/L　　　　　ProcSocExpBiol1954 胶乳凝集试验　　　　1.0mg/L　　　　　Nature(London)1961 高敏乳胶增强浊度 0.35mg/ml Dade Germany2000 荧光抗体法 —Nature(London)1961 放射免疫测定法 3μg/L JLabClinMed1976

  13. CRP检测方法 -免疫沉淀试验 • 检测CRP原始方法. • 将兔抗CRP血清吸入毛细管内。 • 把它浸入被测血浆或血清内,因毛细管虹吸作用被吸入,与抗CRP血清形成接触界面。 • 这种方法较粗糙,取得结果时间较长,也不太正确可靠.

  14. CRP检测方法 -　免疫浊度法 • 可溶性CRP-Ag与可溶性抗CRP-Ab反应,形成可见的网络状沉淀性IC复合物点. • IC复合物对光具有散射作用,使溶液具有肉眼尚不可见的浊度。 • 在被测样品中加抗血清后一定时间,测定反应系统散射光强度或浊度变化,可对被检物及其浊度加以检测。 • 根据仪器的光学系统,浊度法分为散射浊度法和透射浊度法两类。 • 许多自动化生化分析仪和自动化免疫测定仪都可CRP测定项目。

  15. CRP检测方法 -　胶乳凝集试验(LAT) • 将强化的兔抗CRP抗体固定于胶乳微粒上。 • 加入被测样品后与CRP在3分钟内形成肉眼可见的凝集物。 • 胶乳强化浊度法的灵敏度优于传统浊度法,试剂稳定性佳。

  16. 检测方法 - 标记免疫测定 • ELISA和免疫发光法和化学发光法等都可用于CRP的测定。 • 化学发光法的灵敏度和定量精确度可与RIA媲美,而无同位素污染,试剂稳定,分析速度快。 • CRP-POCT(床边试验)法－ ELISA干片法。 • 把磷脂酰胆碱(PC)化学交联固定于载体。 • 被测CRP与载体的PC结合。 • 被酶标记的抗CRP单抗结合。 • 可灵敏、特异性检测CRP,约5分钟可得结果.。

  17. 检测方法 - 胶乳增强试验（shCRP）： • 常规CRP检验方法可在感染或组织损伤时检测出CRP>10mg/L。 • 该检测方法具有较高的灵敏度。 • 这个水平（0.1～10mg/L）的C反应蛋白又被称为超敏C反应蛋白（hsCRP）。

  18. CRP检测的评估 • 1、半定量：胶乳凝集试验等已弃用。 • 2、定量： • 散射免疫比浊法、透射免疫比浊法：是目前常用方法。检测限度为5～150 mg／L ，CV＜5% 。 • 胶乳增强试验-shCRP检测：很大程度提高了敏感度。酶免疫分析和荧光免疫分析：有潜在的灵敏度优势。 • 胶乳增强试验-shCRP检测方法很大程度提高了敏感度。 • CRP检测对标本的采集也无特殊要求。 • 高浓度的类风湿因子可产生CRP假性升高。 • CRP筛查的费用远小于其他心血管检查的费用。

  19. 临床应用____参考范围

  20. 临床意义 • 器质性疾病的筛选 • 急性或慢性炎症如伴有细菌感染。 • 自身免疫或免疫复合物病。 • 组织坏死和恶性肿瘤。

  21. 临床意义—感染的诊断与鉴别 • CRP在细菌感染发生后6～8h即开始升高，24～48h达到高峰，在感染消除后其含量急骤下降，一周内可恢复正常。 • CRP在病毒感染时无显著升高。 • 革兰阴性感染：可发生最高水平的CRP，有时高达 500 mg／L。 • 革兰阳性菌感染和寄生虫感染：通常引起中等程度的反应，典型的是在100 mg／L 左右。 • 病毒感染：引起的反应最轻，通常不超过50 mg／L，极少超过 100 mg／L。 • 在细菌感染的急性期，CRP显著升高，寡聚腺苷合成酶正常； • 在病毒感染时CRP水平正常或轻微升高，寡聚腺苷合酶水平升高。

  22. 临床意义 • C反应蛋白是心血管疾病最强的危险指标，C反应蛋白水平可预测将来心肌梗塞及中风的危险性。 • C反应蛋白含量>2.1mg/L的人与<1mg/L者比较: • 将来发生心肌梗塞的危险性为后者的2.9倍； • 发生缺血性中风的危险性为后者的1.9倍； • 发生外周动脉血管性疾病的危险性为后者的4.1倍。 • 在痛疼开始后数小时内，CRP升高，3~4d达高峰，在CK-MB回到正常后7-10d也降至正常。

  23. 临床意义－自身免疫或免疫复合物病。 • 　系统性红斑狼疮、多肌炎、系统性硬化症CRP无明显改变，所以可用于与风湿性疾病鉴别。 • 若存在发热为并发感染而非疾病的恶化。

  24. 临床意义-癌症 • 已升高或正在升高的CRP预示着不良的预后及常提示转移。 • 结肠癌是导致死亡人数第二多的癌症。 研究显示，血液C-反应蛋白含量最高的那些人患结直肠癌的危险，是C-反应蛋白含量最低者的两倍.

  25. 临床意义 • 评估疾病活动性和疗效监控 • CRP为 10～50 mg／L表示轻度炎症。 • CRP升至 100mg／L表示较严重的疾病，它的严重程度在必要时需静脉注射。 • CRP > 100 mg／L表示严重的疾病过程并常表示细菌感染的存在。

  26. 临床意义-抗生素的治疗监测 • 系列血浆CRP的测定，可用来作为下列情况的治疗监测： • 在许多感染时最有效使用抗生素治疗。 • 根据CRP水平的变化来决定抗炎药物的剂量。 • 在CRP下降至正常时，中 断抗菌素治疗。 • 在高危人群缺少微生物学诊断时，为抗生素治疗的指引。

  27. 临床意义-抗生素的治疗监测

  28. 临床意义-外科 患者施行手术后24～72h,血中CRP水平明显升 高,约在第5～7天恢复正常。 • 凡骤升后持续高水平多预示合并感染。 • 对中、大手术患者,在术前和术后3～7天各作 常规检测一次。 • 凡术后5～7天CRP仍持续高水平者,理应怀疑 合并感染,并配合治疗作随访监测。

  29. 临床意义-内科 • 肺炎: CRP＞100mg/L，强烈提示细菌感染，如化脓性支气管炎或肺炎;典型的病毒性肺炎不会超过50mg/L。 • 心血管病，在痛疼开始后数小时内，CRP升高， 3-4d达高峰，在CK-MB回到正常后7-10d也降至正常。 • 代谢综合征 代谢综合征分组，根据CRP水平可将为 • 低危险组，<1 mg/Ｌ • 中危险组，1～3 mg/Ｌ • 高危险组，>3 mg/Ｌ

  30. 临床意义-妇产科 • 盆腔炎和子宫附件炎. CRP值升高 • 盆腔肿块和子宫肌瘤通常多为阴性。 • 诊断胎膜早破宫内感染. 胎膜早破时，如母亲CRP在产前6-19h超过50mg/L可作为出现AIS的标准； 产后第一天出现的AIS的CRP将比正常分娩时高出2-3倍。 • 无并发症的CT和NG感染不会引起CRP升高。 但扩散到盆腔可引起急时相反应。

  31. 临床意义-儿科 新生儿浓毒血症: • 出生3天前CRP＞10mg/L表示感染. • 如果CRP在24h内没有超过10mg/L，多无新生儿感染. 小儿发热 : • 患病超过12h，CRP显著＞40mg/L，ESR显著＞30mm/h应关注为细菌性感染。 脑膜炎 : • CRP＞20mg/L提示为细菌感染的可能； • ＞100mg/L时具有细菌感染诊断价值。 • 结脑CRP在20-60 mg/L。 • 成功的治疗可使CRP在一周内降至正常。

  32. 小 结 • CRP是一五球体结构的高度保守的急时相蛋白。 • CRP为一模式识别分子，与特殊的分子结构结合而发挥作用。 • 为宿主先天性免疫应答的一部分，在机体平衡和自身保护中起着重要贡献。 • 血CRP浓度的升高在为炎症和组织损伤的标志。 • CRP生物学的作用似乎相当复杂的，且为多效的。 • CRP与许多疾病的发病机理有关。 • CRP对机体许多疾病的早期诊断、鉴别诊断、疗效观察、预后评估以及指导临床抗菌素的合理应用等有重要的意 义。 • CRP的检测，对于普通的炎症用常敏CRP检测即可，而对于心血管疾病、代谢综合征、自身免疫性疾病、新生儿 疾病检测等则需用超敏CRP检测方法方可。

  33. 谢谢！

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