ODREĐIVANJE SLOBODNIH LAKIH LANACA U SERUMU I URINU

1. Danica Matišić ODREĐIVANJE SLOBODNIH LAKIH LANACA U SERUMU I URINU

2. Elektroforeza serumskih proteina Vizualni pregled Klinička sumnja ili prisutnost monoklonske vrpce Bez promjena Bence Jones protein? Imunofiksacija i/ili imunoelektroforeza Elektroforeza proteina u mokraći (100 x ukonc. uzorak) Definicija M-P (određ. razreda i tipa) Negativ. nalaz Denzitometrijska kvantifikacija M-P Prisutan BJ protein Imunofiksacija i/ili imunoelektroforeza Opisni nalaz + klinička informacija daju tumačenje nalaza KROHEM SKUPINAPododbor za laboratorijsku hematologiju i morfologijuIMUNOKEMIJA: D. Matišić, V. Preden-Kereković Ako na elektroforetskoj slici, najmanje 100x ugušćenog urina, ne nalazimo suspektnu monoklonsku vrpcu nalaz BJP smatramo negativnim DIJAGNOSTIČKI ALGORITAM ZA DEFINICIJU MONOKLONSKOG PROTEINA

3. A.R. Bradwell: Free Light Chain Assay Razvoj Free Light Chain reagensaza kvantitativno određivanje slobodnih lakih lanaca, SLL, kapa (κ) ililambda (λ) tipa, otvorio je mogućnost njihovih aplikacija i povećao njihovu kliničku važnost.

4. B: koncentracija lakih lanaca u serumu kod zdravihispitanika,bolesnika saNSMM i MMLL kapa i lambda tipa A B Osjetljivost SPE Osjetljivost IF A: koncentracija lakih lanaca u serumu kod zdravihispitanika,bubrežnih bolesnika i bolesnika sa MMLL kapa i lambda tipa

5. Serum Free Light Chain Measurements:Move to Center StageArthur R. Bradwell(Clinical Chemistry. 2005;51:805-807.) serumska konc.SLL korelira samo s aktivnošću koštane srži, što znači da njihov nalaz može biti neovisan biljeg monoklonskih gamapatija jedan posebno važan aspekt SLL je njihov kratak poluživot: 2-3 sata za kapu i 5–6 sati za lambdu; što je 150 x kraće vrijeme od 21 dana koliko je poluživot IgG molekule tako konc. slobodnih lakih lanaca omogućuje vrlo brzo procjenu učinka kemoterapije: 92-128 dana brže nego konc. M Ig bolesnici koji su prema nalazu intaktnog M Ig, u remisiji mogu još uvijek imati povišenu konc. SLL što indicira ostatnu bolest koristeći isti argument, bolesnici čija konc SLL počinje rasti nakon modernog intenzivnog tretmana ide u prilog relapsu bolesti

6. FREELITE™ Serum - Free Light Chain Assays Kvantitativno mjerenj SLL pokazuje da abnormalnu koncentraciju lakih lanaca ili njihov omjer imaju 96% bolesnika s IIMM 82% bolesnika s NSMM 98 % sa AL amiloidozom svi s LCMM i LCDD Kvantitativno mjerenje SLL može pomoći u postavljanju Dijagnoze: kod LCMM, NSMM, AL amiloidoza, LCDD, Waldenström makroglobulinemije kao i za Praćenje: terapije i toka same bolesti kod: IIMM, LCMM, NSMM, AL amiloidoza, LCDD, Waldenström makroglobulinemije kao i praćenje minimalne rezidualne bolesti u mnogih bolesnika s MM koji su bili u kompletnoj remisiji prema standarnim testovima

7. Određivanje konc SLL ima posebnu ulogu u dijgnoastici AL amiloidoze s obzirom da su izvor fibrila monokl. SLL Njihova je konc. nedostatna da bi se registrirala elektroforezom Katzmann i suradnici su pokazali da određ. konc. SLL u kombinaciji s IF omogućuje postavljanje dijagnoze AL amiloidoze: kombinacijom određivanja SLL i IF u grupi od 110 bolesnika oni su pravilno dijagnosticirali 109 (99 %) Koristeći samo konc. SLL pravilno je dijagnosticirano 91 % Novi internacionalni konsenzus za vođenje AL amiloidoze uključuje mjerenje konc. SLL Dispenzieri i sur: uvođenje određivanja SLL povećalo je moć procjene hematološkog odgovora kod bolesnika s niskim tumorskim uzorkom.

8. Koncentracija slobodnih lakih lanaca Ig ovisi o produkciji plazma stanica i bubrežnom klirensu. Kod nekih bolesnika s monoklonskom gamapatijom količina SLL ostaje ispod reapsorpcionog kapaciteta bubrega tako će abnormalna konc. serumskih SLL biti nedetektibilna u urinu u tim slučajevima rezultat SLL u urinu biti će nepouzdan Katzmann JA. i Hill P.G. pokazali su na velikom broju bolesnika, u dvije odvojene studije, da zbog oštećenja bubrega (približno 25 % bolesnika s monoklonskim gamapatijama) možemo naći lažno pozitivne nalaze SLL u serumu odnosno lažno negativne u urinu. Uz poliklonsku sintezu imunoglobulina i/ili bubrežnog oštećenja, naći ćemo 10 – 20x povećanu sintezu lakih lanaca u serumu Bubrežna ekskrecija SLL raste s koncentracijom u serumu ali značajno opada kada je visoka koncentracija kombinirana sbubrežnim oštećenjem.

9. Skupljanje 24 satnog urina je :mukotrpno za bolesnikei uglavnom netočno; -laboratorijski postupak evaluacije monoklonskog proteina se znatno produljuje Stoga mnogi kliničari sugeriraju da se 24 satni urin eliminira iz skriniga M-P Urin će se obrađivatidiskontinuirano tj. kod raznih disproteinemija kao i i za praćenje bolesti jednom kad je već monoklonski protein identificiran.

10. Mjesečne novine Medicinskog laboratorija Mayo klinike (Communique):august/ 2007: 1. Kvantitativno mjerenje SLL uz SPE i IE postiže se veća osjetljivost u dijagnostici monoklonskih gamapatija što je posebno važno kod: MMLL, AL amiloidoza, LLDD, NSMM 2. Primjenjujući#87997 Monoclonal Protein Study, Expanded Panel, Serum, (ukupni prot., SPE , kapa i lambda u serumu i κ:λ omjer) eliminiramo potrebu sakupljanja 24 satnog urina 3. Određivanjem SLL moguće je razlučiti: visoko i nisko rizične bolesnike u skupini MGUS: bolesnici s abnormalnim κ:λ omjerom imaju 2,5 x povećan rizik od progresije bolesti u MM ili slične bolesti za većinu MGUS bolesnika preporuča se laboratorijska obrada jednom godišnje kako približno 40 % MGUS dijagnosticiranih bolesnika spada u nisko rizične, kombinacijom κ:λ omjera i koncentracije M-proteina može se kod tih bolesnika znatno skratiti godišnji program kontrole (studija provedena na 1140 bolesnika) 4. FREELITE™ Serum može se koristiti za praćenje toka bolesti kod bolesnika sa M-proteinom koji nije mjerljiv SPE čime bi kliničari mogli smanjiti broj biopsija koštanih srži

11. Elektroforeza serumskih proteina KROHEM SKUPINAPododbor za laboratorijsku hematologiju i morfologijuIMUNOKEMIJA: D. Matišić, V. Preden-Kereković Vizualni pregled Klinička sumnja ili prisutnost monoklonske vrpce Bez promjena Bence Jones protein? Imunofiksacija i/ili imunoelektroforeza FREELITE™ : SLLκ, SLLλ + κ/λ Definicija M-P (određ. razreda i tipa) Denzitometrijska kvantifikacija M-P Elektroforeza proteina u mokraći (100 x ukonc. uzorak) Ako na elektroforetskoj slici, najmanje 100x ugušćenog urina, ne nalazimo suspektnu monoklonsku vrpcu nalaz BJP smatramo negativnim Negativ. nalaz Prisutan BJ protein Opisni nalaz + klinička informacija daju tumačenje nalaza Imunofiksacija i/ili imunoelektroforeza DIJAGNOSTIČKI ALGORITAM ZA DEFINICIJU MONOKLONSKOG PROTEINA

12. Hill PG, Forsyth JM, Rai B, Mayne S. Serum free light chains: an alternative test to urine Bence Jones proteins when screening for monoclonal gammopathies. Clin Chem 2006;52:1743-1748. Elektroforeza proteina u serumu + FREELITE kapa i lambda i Kapa/lambda omjer FREELITE: nalaz abnormalan SPE normalna FREELITE: nalaz abnormalan SPE abnormalna FREELITE: nalaz normalan SPE abnormalna FREELITE: nalaz normalan SPE normalna Prisutan intaktni monokl. Ig ili BJP Prisutan intaktni monokl. Ig Prisutan BJP M-P negativan

13. FREELITE™ Serum Free Light Chain Assays

14. FREELITE™ Serum Free Light Chain Assays

15. Kristali Bence-Jones proteinaRazumijevanje strukture kristala BJP moglo bi biti ključno za razvoj selektivne terapije lijekovima. Microgravity Space is the laboratory of the next millennium Mikrogravitacijski uvjeti u svemiru su jedinstveni okoliš za istraživanja koja vode novim produktima i tehnologijama. STS-95 STS-80