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第三节 分 枝 杆 菌 属 ( Mycobacterium )

第三节 分 枝 杆 菌 属 ( Mycobacterium ). 分枝杆菌属的分类. √. 结核分枝杆菌 牛分枝杆菌 非洲分枝杆菌 田鼠分枝杆菌. 结核分枝杆菌复合群 ( 生长慢不产色 ). √. Ⅰ 群 ( 光产色菌 ) Ⅱ 群 ( 暗产色菌 ) III 群 ( 不产色菌 ) Ⅳ 群 ( 快速生长菌 ). 非结核分枝杆菌. 麻风分枝杆菌 ( 人工培养基不生长 ). 结 核 分 枝 杆 菌 ( Mycobacterium tuberculosis). 1882 年 3 月 24 日德国细菌学家郭霍发现. 一、分 类.

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第三节 分 枝 杆 菌 属 ( Mycobacterium )

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Presentation Transcript

  1. 第三节 分 枝 杆 菌 属 (Mycobacterium)

  2. 分枝杆菌属的分类 √ 结核分枝杆菌 牛分枝杆菌 非洲分枝杆菌 田鼠分枝杆菌 结核分枝杆菌复合群 (生长慢不产色) √ Ⅰ群(光产色菌) Ⅱ群(暗产色菌) III群(不产色菌) Ⅳ群(快速生长菌) 非结核分枝杆菌 麻风分枝杆菌(人工培养基不生长)

  3. 结 核 分 枝 杆 菌 (Mycobacterium tuberculosis) 1882年3月24日德国细菌学家郭霍发现

  4. 一、分 类 结核分枝杆菌(90%) 牛分枝杆菌 (5%) 非洲分枝杆菌(5%) 田鼠分枝杆菌 结核分枝杆菌复合群 (生长慢不产色)

  5. 二、生 物 学 特 性 结核杆菌抗酸染色(×1000)

  6. 结核杆菌的扫描电镜照片

  7. 结核杆菌菌落

  8. “谗、懒、顽、变” “谗、懒”：胞壁含脂质高，营养要求高， 生长缓慢； 罗-琴(L-J培养基) （含蛋黄、甘油、马铃薯、 无机盐、孔雀绿等） 培养需2-4周有菌落生成

  9. “顽” ：对某些理化因素抵抗力较强 抗干燥：在干燥痰中可生存6-8个月， 附在尘埃上传染性可保持8-10d; 抗酸碱：抗6%H2SO4或4%NaOH达30min(集菌) 抗染料：1:13000孔雀绿或1:75000结晶紫

  10. “变”：形态、菌落、毒力及耐药性均可变异 卡介苗:毒力变异株 （Bacille Calmette-Guerin，BCG） 耐药变异株:药物选择作用 (应规范用药,药敏试验选敏感药物联合用药) R-S变异:菌落变异 L型变异:药物等诱导而成,TSA-L培养基生长

  11. 肺结核患者外周血中的分枝杆菌伴非抗酸颗粒，肺结核患者外周血中的分枝杆菌伴非抗酸颗粒， 培养法　抗酸染色　×1000

  12. 杀灭结菌的方法： 1、阳光下暴晒2h； 2、5%-12%来苏作用5min-2h； 3、75%酒精接触2min； 4、煮沸1min； 5、焚烧—是最简便的灭菌方法

  13. 生化反应 结核分枝杆菌、牛分枝杆菌 (-) 非结核分枝杆菌 (+) 热触酶试验 结核分枝杆菌 (+) 牛分枝杆菌 (-) 硝酸盐还原试验 烟酸试验 烟酰胺酶试验

  14. 三、 细 菌 学 检 验 结 核 病 确 诊 的 重 要 依 据

  15. (一)标本的采集与注意事项 无菌密闭容器 及时接种 低温送检 痰液合格收检 注意事项 标本采集：视病变部位取标本 如：痰取晨痰约5ml

  16. (二) 检 验 程 序

  17. 集菌涂片 37℃ 30min 4%NaOH 1、沉淀集菌法： 2、漂浮集菌法：生理盐水稀释 离心，取沉渣 √ 高压灭菌液化 振荡30min 二甲苯1ml 吸取泡沫和油层接界部分 意义:阳性可确诊为结核病，有传染性。但检出率低; 制定治疗方案和化疗疗效评价的重要指标.

  18. 染 色 抗酸染色 金胺O染色

  19. 抗酸染色镜检结果报告方式 痰检至少2次阳性!!!

  20. 操作及报告结果标准化 • 《中国结核病防治规划实施工作指南》（2008新版） 《痰涂片镜检标准化操作及质量保证手册》 • 结核病诊断细菌学检验规程（1995年）

  21. 生物安全！！

  22. 生物安全！！ 请注意：废弃标本和污染物的处理 • 痰盒和废弃标本等污染物，均需经高压蒸汽灭菌后才能丢弃或清洗，严禁不经灭菌随意处理。 • 痰盒等污染物如采用焚烧处理，须置于焚烧炉内彻底焚化。焚烧不彻底或暴露焚烧是有害的。 • 痰检工作面的消毒：可将痰标本置于一搪瓷盘中，在操作橱内进行痰涂片操作。操作完毕后将盘与废弃物等一并进行高压蒸汽灭菌，或与操作台面同时以3％石炭酸或其他可靠消毒液擦拭后，再以紫外线灭菌灯（距离≤1米）照射30min。

  23. 分离培养与鉴定 标本前处理后培养!!! 、小川培养基 Middle brook7H10/11 固体培养基 L-J（选择）、PNB和TCH（鉴别） 液体培养基（Middle brook7H9/12和Sauton培养基） L型培养基（TSA-L培养基、92-3TBL） 全自动快速培养鉴定药敏系统：Bactec 全自动系统等 意义:金标准，阳性可确诊为结核病，有传染性。 并可进一步做生化反应、药敏试验，但需时长。

  24. 标本培养前处理 1、痰： 酸 / √碱处理 　　碱 / 酸性 L-J 培养基 胰蛋白酶-新洁尔灭法 NaOH-NALC法 2、脑脊液、胸腹水：离心、沉淀（有污染碱处理） 3、尿液：离心、沉淀（碱处理） 4、脓液：酸/碱处理

  25. 培养结果记录与报告方法

  26. 分离培养与鉴定 标本前处理后培养 、小川培养基 Middle brook7H10/11 固体培养基 L-J、PNB、TCH 液体培养基（Middle brook7H9/12和Sauton培养基） L型培养基（TSA-L培养基、92-3TBL） 全自动快速培养鉴定药敏系统：Bactec 960系统等 意义:金标准，阳性可确诊为结核病，有传染性。 并可进一步做生化反应、药敏试验，但需时长

  27. L 菌 检 测 注意！ 细胞壁染色 P51 分离培养与鉴定（TSA-L培养基、92-3TBL） 意义:多次检出L型是活动性结核的诊断依据之一， 痰菌阴性指标为细菌型与L型均阴性

  28. 基 因 检 测 动物试验 免疫学检测

  29. 结核菌素实验结果

  30. 结核分枝杆菌－－结核菌素试验 • 原理：用结核菌素进行皮肤试验，以检测受试者对结核杆菌是否有细胞免疫及迟发型超敏反应的试验。 • 结果：注射部位是否出现红肿硬结判断结果 ＜5mm为阴性 ≥5mm为阳性 ＞ 15mm为强阳性 • 应用：选择卡介苗接种对象；判断卡介苗接种效果；辅助诊断婴幼儿结核病；测定肿瘤患者细胞免疫状态

  31. 标本 直接涂片 集菌涂片 染色镜检 基因检查 √ 前处理 √ L型 培养 PCR DNA探针杂交 动物 试验 分离 培养 √ 荧光 染色 抗酸 染色 观察生长情况 报告 鉴定 报告 分枝 杆菌 报告 抗酸 杆菌 抗酸 染色 生化 反应 药敏 试验 报告 报告（种别）

  32. 实验室诊断存在的主要问题 * 缺乏快速早期准确的诊断方法 * 合并HIV感染者诊断 * 无症状感染者与患者的鉴别 * 耐药性的快速鉴定

  33. 四、 流 行 病 学 与 防 治 原 则 （一）流 行 病 学 传染源：患者（开放性肺结核患者） 传染途径：呼吸道、消化道、皮肤黏膜破损处 临床类型：儿童（原发感染）；成人（原发后感染） 疾病特点：人群普遍易感； 以结核结节和干酪样坏死为主要病理特征； 细胞免疫为主，同时获得对结菌的迟发型超敏反应

  34. （二）防治原则 早诊断、早治疗（及时、敏感、足量、联用、全程） BCG、DNA疫苗

  35. 思 考 题 • 痰标本为何要做集菌前处理? 怎样集菌? 痰检抗酸杆菌的意义？ • 痰检需注意的生物安全问题？查资料了解一下 • 查资料了解国内外结核疫情?

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