Jako referenční gen byl použit PSMB2 gen (Kriegova et al. BMC Mol Biol. 2008) .

1. * * Role Th17 buněk u plicní sarkoidózyFillerová R1, Kriegová E1, Žurková M2, Kolek V2, Petřek M11Laboratoř imunogenomiky a proteomiky, Ústav imunologie LF UP Olomouc. 2Klinika respirační medicíny LF UP a FN Olomouc Závěr Cíl: Sledování expresních profilů vybraných cytokinů produkovaných Th17 buňkami, včetně jejich aktivátorů a inhibitorů, u plicní sarkoidózy. • V BAL buňkách pacientů se sarkoidózou byla zvýšená mRNA exprese cytokinu IL-21 ve srovnání s kontrolami, exprese dalších cytokinů IL-17A, IL-17F a IL-22 produkovaných Th17 buňkami nebyla zvýšená mezi studovanými skupinami. • Detekovali jsme zvýšené množství transkriptů 4 aktivátorů Th17 buněk ( IL-6, TGF-β, RORγt a IL-23) a 2 inhibitorů Th17 buněk ( IL-27, T-bet) u sarkoidózy ve srovnání s kontrolními jedinci. • Naše pilotní výsledky naznačují, že Th17 buňky se nepodílí na iniciaci a rozvoji zánětu u plicní sarkoidózy. Budeme dále studovat jejich úlohu v plicích pacientů se sarkoidózou. Úvod Výsledky Plicní sarkoidóza • Ze 4 sledovaných cytokinů produkovaných Th17 buňkami byla mRNA exprese v BALbuňkách zvýšena u pacientů se sarkoidózou ve srovnání s kontrolami pouze u cytokinu IL-21 (p=0,001) (Obr.1) • Při sledování profilu exprese aktivátorů Th17 buněk, byla mRNA exprese u pacientů ve srovnání s kontrolami zvýšena u IL-6 (p=0,0001), RORγt (p=0,001) IL-23 (p=0,0003) a TGF-β (p=0,02) (Obr.2 a 3) • Dále při sledování profilu exprese inhibitorů Th17 buněk, byla mRNA exprese zvýšena u T-bet (p=0,00001) a IL-27 (p=0,002) u pacientů ve srovnání s kontrolami (Obr.4) • Plicní sarkoidózaje zánětlivé granulomatózní onemocnění, jehož etiologie je zatím stále nejasná. • V patogenezi sarkoidózy hrají důležitou roli CD4+ T-lymfocyty, zejména pak buňky Th1 typu a jejich produkty. Cytokiny produkované Th17 buňkami Inhibitory cytokinů produkované Th17 buňkami Th17 buňky • Th17 buňky vznikají také diferenciací CD4+ T-lymfocytů a podílí se na rozvoji zánětu u řady onemocnění produkcí specifických cytokinů, které mohou indukovat expresi dalších molekul (např. CXCL9, CXCL10 a CXCL11). • Role Th17 buněk u sarkoidózy je zatím neobjasněna. Obr. 4:mRNA expreseinhibitorů cytokinů produkovaných Th17 buňkamiv BAL buňkách pacientů se sarkoidózou(S) a kontrol (C). Data jsou prezentována jako průměrné hodnoty relativní exprese. * p< 0.05 Obr. 1:mRNA expresecytokinů produkovaných Th17 buňkamiv BAL buňkách pacientů se sarkoidózou(S) a kontrol (C). Data jsou prezentována jako průměrné hodnoty relativní exprese. * p< 0.05 Diferenciace Th17 buněk Aktivátory cytokinů produkované Th17 buňkami I Aktivátory cytokinů produkované Th17 buňkami II * * Obr. 2 a 3:mRNA expreseaktivátorů cytokinů produkovaných Th17 buňkamiv BAL buňkách pacientů se sarkoidózou(S) a kontrol (C). Data jsou prezentována jako průměrné hodnoty relativní exprese. * p< 0.05 Immunol Res. 2008;41(2):88 Měřený soubor Charakteristika měření • Jako referenční gen byl použit PSMB2 gen (Kriegova et al. BMC MolBiol. 2008). • Použité Intron-spanning primery:Assays-on-Demand™ Gene Expression (Applied Biosystems) nebo LNA primers/probes (Roche, Universal Probe Library) • Relativní expresebyla vypočítána metodou druhé derivace (RotorGene Software 6.1.71, Corbett Research). • Pacienti se sarkoidózou(S, n=58), (klinické projevy + výskyt granulomů v biopsiích+CD4+lymfocytární alveolitida) • Kontrolní jedinci (C, n=20) (pacienti bez infekce s normálním bronchoalveolárním buněčnýmprofilem) Studované molekuly • Cytokiny produkovanéTh17 buňkami: IL-17A, IL-17F, IL-21, IL-22 • Aktivátory produktů Th17 buněk: IL-6, RORγt, IL-23, TGF-β, STAT-3 • Inhibitory produktů Th17 buněk:T-bet, IL-27 Metody • Metodou kvantitativní RT-PCR (RotorGene 3000 system, Corbett Research) byla měřena mRNA exprese studovaných molekul v buňkách bronchoalveolární laváže (BAL). Grantová podpora: IGA MZCR NR/9037-4, MSM6198959205., IGA MZCR NS/10267-3.