Imunologie - LP Rezidenti Anatomie Patologica, an II Modul - IMUNOLOGIE

1. Imunologie - LPRezidenti Anatomie Patologica, an II Modul - IMUNOLOGIE

2. IMUNOHISTOCHIMIA • metoda sensibila de vizualizare specifica a unor structuri moleculare, de obicei de natura proteica (antigene, epitopi), de la nivelul tesuturilor, prin microscopie optica. • se bazeaza pe notiuni de imunologie si de histologie • urmareste identificarea unor constituenti tisulari in situ cu ajutorul reactiei specifice antigen-anticorp, acesta din urma legat de un trasor vizibil, pe preparate la parafina sau la gheata. • structurile ce pot fi identificate prin aceasta metoda: - asociate celulelor - localizate la nivelul matricii extracelulare

3. IMUNOHISTOCHIMIA - probele biologice - fixate si incluse la parafina – etape ce asigura conservarea celulelor si a tesuturilor într-o manieră cât mai apropiată realitătii si, totodată, reproductibilă. - criterii de alegere a fixatorilor - includerea tesuturilor la parafina; - utilizarea microtomului pentru obtinerea de sectiuni - fixarea sectiunilor pe lame de sticla tratate special (lame electrizate, silanizate, etc) Reactivul pivot - anticorpul. - anticorpii sunt imunoglobuline solubile, sintetizate si secretate de plasmocite. Structura IgG1 - în specia umana au fost descrise cinci clase de imunoglobuline, care în ordinea nivelurilor serice sunt: IgG, IgA, IgM, IgD si IgE - diversitatea anticorpilor este imensa, estimata la o valoare cuprinsa intre 1015-1018 specificitati diferite, necesara recunoasterii unui numar imens de structuri antigenice, a caror diversitate are o valoare comparabila.

4. IMUNOHISTOCHIMIA Notiuni de baza: - titrul si dilutiile anticorpilor, - timpul de incubare - temperatura de incubare - enzime - substraturi - controale - contracoloratie - colorare (zgomot) de fond - cauze Metode de colorare - directa - indirecta in doua etape (doi pasi)  in trei etape (trei pasi):

5. IMUNOHISTOCHIMIA Metoda complexelor imune enzimatice solubile - PAP (peroxidaza-anti-peroxidaza) - APAAP (fosfataza alcalina-anti-fosfataza alcalina) Metode bazate pe reactia avidina-biotina - ABC - avidin-biotin complex - LAB - labelled avidin-biotin Metode bazate pe utilizarea dextranului

6. FISH/CISH FISH – Fluorescence in situ hybridization - permite identificarea/localizarea unor cromosomi sau a unor secvente ADN particulare - sondele de detectie - marcate cu fluorocromi - leaga specific secventele de ADN complementare - probele biologice - sectiuni la gheata - citospin (celule depuse pe lame prin centrifugare) - utilizata frecvent in diagnostic pentru: - afectiuni congenitale (Sdr. Down, sdr. Velocardiofacial, sdr. Prader-Willi, sdr. Angelman, etc) - afectiuni hematologice (leucemii limfoblastice acute, leucemii mieloide cronice, etc) Metoda se poate adapta si pentru mARN CISH – Chromogenic in situ hybridization - are acelasi principiu cu FISH - sondele de detectie sunt cuplate cu peroxidaza, iar vizualizarea se realizeaza cu substratul cromogen specific enzimei - probele biologice – sectiuni la parafina, ce se pot ulterior contracolora si vizualiza la microscopul optic - metoda detecteaza amplificari genice, translocatii, numar de cromosomi - detecteaza amlificarea genei ErbB2 (Her-2/neu) in cancerul mamar